1997 Fiscal Year Annual Research Report
胎児期および出生後環境のステロイドホルモンが脳の組織構築に与える影響
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09480214
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| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
河田 光博 京都府立医科大学, 医学部, 教授 (60112512)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
西 真弓 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (40295639)
森田 規之 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (50239662)
小澤 一史 京都府立医科大学, 医学部, 講師 (60169290)
由利 和也 京都府立医科大学, 医学部, 助教授 (10220534)
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| Keywords | ステロイドホルモンレセプター / ポリクローナル抗体 / プローブ / 免疫細胞化学法 / in situハイブリダイゼーション法 / 脳内分布 / 部位特異的発現 |
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| Research Abstract |
ステロイドホルモンレセプター各ドメインに対するポリクローナル抗体の作成:エストロゲン、グルココルチコイド、ミネラルコルチコイドレセプターのcDNAを制限酵素によってホルモン結合ドメイン、DNA結合ドメイン、全長の異なる組み合わせのDNAフラグメントに分け、グルタチオンSトランスフェラーゼとの融合蛋白を発現するpGEX-3Xプラスミッド内に、平滑末端結合により挿入した組換えベクターを用意した。できたプラスミッドを大腸菌にトランスフォームさせ、増殖させたのち融合蛋白を可溶化し、精製した。ファクターXによって目的とする蛋白を単離、精製ののちアジュバントを作り、ウサギを免疫した。抗体の力価検定にはウエスターンブロットやELISAで行い、アフィニティカラムで抗体の精製を行った。
ステロイドホルモンレセプタープローブの作成:制限酵素で切り出したcDNAのフラグメントをプラスミッドpGEM-4のマルチクローニングサイトに組み込ませ、大腸菌にトランスフォームさせたのち、直鎖化し、SP6RNAポリメラーゼまたはT7RNAポリメラーゼによるインビトロトランスクリプション法により、フルオレセイン標識RNAプローブを作成した。
免疫細胞化学法、in situハイブリダイゼーション法による組織化学的検索:これらの抗体やプローブを用いて免疫細胞化学法、in situハイブリダイゼーション法によって、ラット胎生期、新生時期、成熟時での脳組織を検索し、どの時期のどの部位にどのようなステロイドホルモンレセプター蛋白ならびにmRNAが発現しているのか詳細に観察した。脳においてはそれぞれの部位特異的に発現が見られ、部位特異的な遺伝子発現調節がなされている可能性が示唆された。
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[Publications] Pasterkamp R.J.et al.: "Differential expression of estrogen receptor mRNA and protein in the femele rat preoptic area" Neurosci.Lett.239. 81-84 (1997)
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[Publications] Hu Z.,et al.: "Adrenalectomy-induced granule cell death predicated on the disappearance of glucocorticoid receptor immunoreactivity in the rat hippocampal granule cell layer" Brain Res.778. 293-301 (1997)
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[Publications] Hu Z.,et al.: "Chronic loss of glucocorticoids followng adrenalectomy down-regulates the expression of glucocorticoid receptor mRNA in the rat forebrain" Eur.J.Neurosci.9. 1778-1783 (1997)
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[Publications] Hu Z.,et al.: "The in vivo time course for elimination of adrenalectomy-induced apoptotic profiles from the granule cell layer of the rat" J.Neurosci.17. 3981-3989 (1997)
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[Publications] Morita N., et al.: "Astrocytic lineage analysis by detection of GFAP promoter activity in vitro" Dev.Neurosci.19. 210-218 (1997)
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[Publications] Nishi M., et al.: "S100b promotes the extension of microtubule associated protein2(MAP2)-immunoreactive neurites retracted after colchicine treatment in rat spinal cord culuture" Neurosci.Lett.229. 212-214 (1997)
