1998 Fiscal Year Annual Research Report
脳型ADPリボシールシクラーゼの精製とcDNAクローニング
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09480221
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
東田 陽博 金沢大学, 医学部, 教授 (30093066)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
星 直人 金沢大学, 医学部, 助手 (90229170)
横山 茂 金沢大学, 医学部, 助教授 (00210633)
橋井 美奈子 金沢大学, 医学部, 講師 (10272957)
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| Keywords | ADPリボース / サイクリックADPリボース / 環状化酵素 / 心筋 / リアノジン受容体 / NAD |
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| Research Abstract |
神経腫瘍細胞NG108-15細胞のADPリボシルシクラーゼは、ムスカリン受容体たカップルしていたが、脳のADPシボシルシクラーゼは、カップルする受容体が、数多くの試みの中からは検出できなかった。一方、心臓のADPリボシルシクラーゼは、イソプロテレノールやノルアドレナリン刺激により、活性化された。私達の目的は受容体とカップルする膜型ADPシボシルシクラーゼの分子を決めることにあるので、さしあたり、ラット心室心筋を出発材料にすることにした。心筋を細分して低調液で、30分間浸け、テフロンガラスホモゲナイザーで均一化した後、1000g、10分の遠心により核を取り除いた。上澄みを105000g、15分の超遠心にかけ、膜分画を得た。それを2%のトライトンXで可溶化し、105000g、30分にて遠心し沈渣を除いた後、上澄みをDEAEカラムにとうした。ADPリボシルシクラーゼ活性は、DEAEカラムを1M NaClを溶出すると、タンパクのピークと一致して検出できた。この分画をさらにゲル濾過すると、アルブミンの溶出よりも少し分子量の低い分画にADPリボシルシクラーゼ活性が回収できた。単一タンパクまでさらに精製を続ける。
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Research Products
(4 results)
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[Publications] Higashida ,H.et al.: "Endomorphins inhibit high-treshold Ca^<2+> channel currents in rodent NG108-15 cells overexpressing m-opioid receptors." J.Physiol.(London). 507. 71-75 (1998)
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[Publications] Ishizaka,N.et al.: "Muscarinic acetylcholine receptors subtypes in the human iris." Brain Res.787. 344-347 (1998)
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[Publications] Furukawa,T.et al.: "Differential interactions of the C teminus and the cytoplasmic I-II loop of neuronal Ca^<2+> channels with G-protein α and βγ subunits." J.Biol.Chem.273. 17595-17603 (1998)
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[Publications] Hoshi,N.et al.: "KCR1: a membrane protein that facilitates functional expression of non-inactivating K^+ currents associates with rat EAG voltage-dependent K^+ channels." J.Biol.Chem.273. 23080-23085 (1998)
