1998 Fiscal Year Annual Research Report
分子シャペロンを活用した高効率タンパク質リフォールディングプロセスの開発
| Project/Area Number |
09555238
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| Research Institution | Kobe University |
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Principal Investigator |
福田 秀樹 神戸大学, 自然科学研究科, 教授 (30263396)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大塚 耕太郎 長瀬産業, 研究開発センター, 主任研究員
近藤 昭彦 神戸大学, 工学部, 助教授 (40205547)
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| Keywords | 分子シャペロン / シャペロニン / GroEL / タンパク質リフォールディング / 融合タンパク質 / アフィニティ分離 / 固定化 |
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| Research Abstract |
本研究では、分子シャペロンの中でもタンパク質フォールディングの介助において重要な役割を担う“シャペロニン(Group I)"を中心に、分子シャペロンを用いたタンパク質再生システムを構築することを試みた。シャペロニンとしては、大腸菌由来のGroEL/ES、好熱菌Thermus thermophilus由来のホロシャペロニン(holo-cpn)および好熱菌Bacillus stearothermophilus由来のcpn60を用いた。また、大腸菌由来の分子シャペロンDnaJについても検討した。それぞれの分子シャペロンに適した高効率な再生方法、および分子シャペロンの効率的な利用法を確立することを試みた。具体的には、以下の4つの分子シャペロンを活用した再生システムについて検討し、その有効性を明らかとした。
1. 高分子ゲルに共有結合で固定化した大腸菌GroEL/ESを用いた再生システム
2. 高分子ミクロスフェアに固定化したT.thermophilus holo-cpnを用いた再生システム
3. 融合分子シャペロンGroEL-(His)_6、MBP-GroES、B.stearothermophilus cpn60-(His)_6、MBP-DnaJを用いた再生システム
4. T.thermophilus holo-cpnと膜分離を組み合わせた再生システム
したがって、目的とする変性タンパク質の種類や変性状態に合わせて、用いるシャペロニンの種類や、再生方法、シャペロニンの再利用法を適切に選ぶことによって、高効率なタンパク質再生システムの構築ができることが明らかとなった。
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[Publications] Ishii,Y.: "Production of MBP (Maltose Binding Protein)-GroES Fuston Protein and Utilization to Stimulate GroEL-Mediated Protein Refolding" Jounal of Fermentation and Bioengineering. 85(1). 69-73 (1998)
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[Publications] Teshima,T.: "Effictent Protein Refolding System Using holo-Chaperonin from Thermophilic Bacterium Thermus thermophilus" Journal of Fermentation and Bioengineering. 85(6). 564-570 (1998)
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[Publications] Teshima,T.: "Affinity Puvification and Immobitization of Fusion Chaperonin GroEl-(Hj)_6 and Utilization to Modiote Protein Refolding" Journal of Fermentation and Bioengineering. 86(4). 357-362 (1998)
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[Publications] Ishii,Y.: "Single-Step Puvification and Characteization of MBP (Maltose Binding Proton)-DnaJ Fuston Protein" Journal of Biochemistry. 124(4). 842-847 (1998)
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[Publications] Teshima,T.: "Protein Refolding System Using Holo-Auperonin from Thermophilic Bacterium Thermus thermophilus" 化学工学シンポジウムシリーズ. 65. 221-226 (1998)
