1999 Fiscal Year Annual Research Report

心筋細胞機能の加齢変化を規定する遺伝子の解析:PT-PCR differential display法による遺伝子クローニングと生理学的機能解析

Research Project

Project/Area Number	09557008
Research Institution	Yamagata University
Principal Investigator	片野由美山形大学, 医学部, 教授 (70018696)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	高橋英嗣山形大学, 医学部, 助教授 (30206792) 石幡明山形大学, 医学部, 助手 (40232326)
Keywords	老化関連遺伝子 / 遺伝子クローニング / 心筋細胞 / differential display / ラット / ノーザンブロット解析 / 未知遺伝子 / RT-PCR
Research Abstract	若齢ラットおよび老齢ラット心臓から抽出したRNAに対して、Differential Display Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction(DDRT-PCR)法を適用し、老化によって発現量の変動する遺伝子の特定を試みた. 方法:2-3カ月齢および24-27カ月齢の雄性Fischer344ラットの左心室からRNAをAGPC法により抽出し、3種類のOligo-dT-Anchor primerを用いてFirst strand cDNAを合成した.それらを基に、各々8種類のArbitrary primerとAnchor primerで[α^<32>P]dATP存在下でPCR反応を行い、反応生成物をDNAシークエンスゲル上で解析した.老化ラット心臓で発現量の異なる多数のバンドを切り出し、DNAの精製、T-vectorへのライゲーション、塩基配列解析を行った.得られたクローンをプローブとし、組織全RNAを用いたノーザンブロット解析により心臓での発現量の変化を検討した. 結果:シークエンスゲル上で分離されたPCR産物のうち、若齢ラット心臓に比較して老化ラット心臓で発現増加のみられるクローンを19個、発現の減少するクローンを66個選択した.それらのうち31クローンについて塩基配列解析を行ったところ、14クローンは未知遺伝子であった.既知遺伝子産物は、ミトコンドリア代謝関連物質、細胞表面糖蛋白質、細胞情報伝達関連物質、ミオシン重鎖サブタイプ等であった.DDRT-PCR法により、老化ラット心臓で発現増加のみられた未知遺伝子について解析中である.

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Ishihata A: "Differential modulation 8 nitricoxide and prostacyclin release in senescent rat heart stimulated by angiotensin II."European J Pharmacol. 382. 19-26 (1999)
[Publications] Ishihata A: "Decreased nitricoxide is responsible for the augmented coronary vasocnstrictimmaged rat heart"Free Radical Biol Med. 27. S77 (1999)
[Publications] Katano Y: "Age-related changes in the expression of AT1 receptor in the rat myocardium and aortic vascular smooth muscle."J Mol Cell Cardiol. 31. 184 (1999)
[Publications] Ishihata A: "Angiotensin II-induced aortic contraction and tyrosine phosphoryletim in the rat."J Mol Cell Cardiol. 31. 183 (1999)
[Publications] Katano Y: "Alteration of the expression of AT1 reaptor by ageing in the rat myocardium and aortic vascular smooth muscle."Jpn J Pharmacol. 79. 209 (1999)
[Publications] 片野由美: "客循環調節因子としてのプロスタサイクリンとNOの役割-老化モデル動物における検討"心筋の構造と代謝. 22(印刷中). (1999)

1999 Fiscal Year Annual Research Report

心筋細胞機能の加齢変化を規定する遺伝子の解析:PT-PCR differential display法による遺伝子クローニングと生理学的機能解析

Principal Investigator

片野 由美 山形大学, 医学部, 教授 (70018696)

Research Products

[Publications] Ishihata A: "Differential modulation 8 nitricoxide and prostacyclin release in senescent rat heart stimulated by angiotensin II."European J Pharmacol. 382. 19-26 (1999)

[Publications] Ishihata A: "Decreased nitricoxide is responsible for the augmented coronary vasocnstrictimmaged rat heart"Free Radical Biol Med. 27. S77 (1999)

[Publications] Katano Y: "Age-related changes in the expression of AT1 receptor in the rat myocardium and aortic vascular smooth muscle."J Mol Cell Cardiol. 31. 184 (1999)

[Publications] Ishihata A: "Angiotensin II-induced aortic contraction and tyrosine phosphoryletim in the rat."J Mol Cell Cardiol. 31. 183 (1999)

[Publications] Katano Y: "Alteration of the expression of AT1 reaptor by ageing in the rat myocardium and aortic vascular smooth muscle."Jpn J Pharmacol. 79. 209 (1999)

[Publications] 片野由美: "客循環調節因子としてのプロスタサイクリンとNOの役割-老化モデル 動物における検討"心筋の構造と代謝. 22(印刷中). (1999)

片野由美山形大学, 医学部, 教授 (70018696)

[Publications] 片野由美: "客循環調節因子としてのプロスタサイクリンとNOの役割-老化モデル動物における検討"心筋の構造と代謝. 22(印刷中). (1999)