1997 Fiscal Year Annual Research Report

低分子量G蛋白質とその標的蛋白質の機能修飾物質の開発と有効利用

Research Project

Project/Area Number	09557012
Research Institution	Hiroshima University
Principal Investigator	菊池章広島大学, 医学部, 教授 (10204827)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	中田元巳住友電工, バイオメディカル研究部, 主査(研究職) 岸田昭世広島大学, 医学部, 助手 (50274064) 小山眞也広島大学, 医学部, 助教授 (00186834)
Keywords	Ral / RalGDS / RalGAP / シナプス小胞
Research Abstract	本年度はRalの抗体と変異体の作成を行った。抗Ral抗体はHa-Ras、Ki-Ras、Rac1、CDC42、RhoAを認識しなかった。ラットの種々の組織におけるRalの発現を解析したところ、顎下腺、大脳、小脳、胸腺、心臓、肺、脾臓、副腎、精巣に分子量28,000の本抗体により検出される蛋白質がそれぞれの膜画分で認められたが、肝臓、膵臓、骨格筋には認められなかった。大脳内におけるRalの局在を解析すると、Ralが膜画分の内でもシナプス小胞に最も高い比活性で存在していた。Ralの23番目のグリシンをバリンに置換したRalG23Vを作成した。そのGTPとGDPに対する親和性や野性型と変化がなかったが、RalGDS(RalのGDP/GTP交換反応促進蛋白質)に対する応答性が40%に減弱していた。また、GTPアーゼ活性は約1/3に低下して、RalGAPに全く反応しなかった。また、RalG23Vの細胞内でのGDP結合型とGTP結合型の量を測定すると、野生型ではほとんどがGDP結合型であるのに対して、RalG23Vでは50%がGTP結合型であった。これらの結果からRalG23Vは活性型であることが明らかになった。RalS23NはGTPに対する親和性が著しく減少して、また、RalGDSに対する応答性も野生型の20%以下になった。GTPアーゼ活性は測定不能であった。したがって、RalS28Nはドミナントネガティブ型として細胞内で機能すると考えられた。RalG86EはGTPとGDPに対する親和性がいずれも低下したが、GDPに対する親和性の低下が著しかった。RalGDSに対する応答性は野生型の20%以下になったが、GTPアーゼ活性およびRalGAPに対する反応性には変化がなかった。今後、これらのRalの抗体や変異体を用いることによりRalの機能解析が行えると考えている。

Research Products
(10 results)

All Other

All Publications (10 results)

[Publications] Murai,H.: "Characterization of Ral GDP dissociation stimulator like (RGL) activities to regulate c-fos promoter and the GDP/GTP exchange of Ral." J.Biol.Chem.272・16. 10483-10490 (1997)
[Publications] Fukata,M.: "Regulation of cross-linking of actin filament by IQGAP1,a target for CDC42." J.Biol.Chem.272・47. 29579-29583 (1997)
[Publications] Okazaki,M.: "Synergistic activation of c-fos promoter activity by Ral GDP dissociation stimulator and Raf." Oncogene. 14・5. 515-521 (1997)
[Publications] Kishida,S.: "Colocalization of Ras and Ral on the membrane is required for Ras-dependent Ral activation through Ral GDP dissociation stimulator." Oncogene. 15・24. 2899-2907 (1997)
[Publications] Matsubara,K.: "The post-translational modifications of Ral and Rac are important for the action of Ral-binding protein 1,a putative effector protein of Ral." FEBS Lett.410・2,3. 169-174 (1997)
[Publications] Ikeda,M.: "Identification and Characterization of a novel protein which interacts with RalBP1,a putative effector protein of Ral." J.Biol Chem.273・2. 814-821 (1998)
[Publications] Ikeda,S.: "Axin,a negative regulator of the Wnt signaling pathway,makes a complex with GSK-β and β-catenin and promotes GSK-3β-dependentβ-catenin phosphorylation." EMBO J.17・5. 1371-1384 (1998)
[Publications] Shirouzu,M.: "Interactions of the amino acid residues at position 31 on the c-Ha-Ras protein with Raf-1 and RalGDS." J.Biol.Chem.(in press). (1998)
[Publications] Yamamoto,H.: "Axil,a member of Axin family,interacts both GSK-3β and β-catenin and inhibits axis formation of Xenopus embryo." Mol.Cell.Biol.(in press). (1998)
[Publications] Kishida,S.: "Axin,a negative regulator of the Wnt signaling pathway pathway,directly interacts with APC and regulates the stabilization of β-catenin." J.Biol.Chem.(in press). (1998)

1997 Fiscal Year Annual Research Report

低分子量G蛋白質とその標的蛋白質の機能修飾物質の開発と有効利用

Principal Investigator

菊池 章 広島大学, 医学部, 教授 (10204827)

Research Products

[Publications] Murai,H.: "Characterization of Ral GDP dissociation stimulator like (RGL) activities to regulate c-fos promoter and the GDP/GTP exchange of Ral." J.Biol.Chem.272・16. 10483-10490 (1997)

[Publications] Fukata,M.: "Regulation of cross-linking of actin filament by IQGAP1,a target for CDC42." J.Biol.Chem.272・47. 29579-29583 (1997)

[Publications] Okazaki,M.: "Synergistic activation of c-fos promoter activity by Ral GDP dissociation stimulator and Raf." Oncogene. 14・5. 515-521 (1997)

[Publications] Kishida,S.: "Colocalization of Ras and Ral on the membrane is required for Ras-dependent Ral activation through Ral GDP dissociation stimulator." Oncogene. 15・24. 2899-2907 (1997)

[Publications] Matsubara,K.: "The post-translational modifications of Ral and Rac are important for the action of Ral-binding protein 1,a putative effector protein of Ral." FEBS Lett.410・2,3. 169-174 (1997)

[Publications] Ikeda,M.: "Identification and Characterization of a novel protein which interacts with RalBP1,a putative effector protein of Ral." J.Biol Chem.273・2. 814-821 (1998)

[Publications] Ikeda,S.: "Axin,a negative regulator of the Wnt signaling pathway,makes a complex with GSK-β and β-catenin and promotes GSK-3β-dependentβ-catenin phosphorylation." EMBO J.17・5. 1371-1384 (1998)

[Publications] Shirouzu,M.: "Interactions of the amino acid residues at position 31 on the c-Ha-Ras protein with Raf-1 and RalGDS." J.Biol.Chem.(in press). (1998)

[Publications] Yamamoto,H.: "Axil,a member of Axin family,interacts both GSK-3β and β-catenin and inhibits axis formation of Xenopus embryo." Mol.Cell.Biol.(in press). (1998)

[Publications] Kishida,S.: "Axin,a negative regulator of the Wnt signaling pathway pathway,directly interacts with APC and regulates the stabilization of β-catenin." J.Biol.Chem.(in press). (1998)

菊池章広島大学, 医学部, 教授 (10204827)