1997 Fiscal Year Annual Research Report
蛋白分解酵素阻害物質SLPIのマウス遺伝子の操作による気道炎症の修飾-とくに肝細胞増殖因子HGFの遺伝子発現への影響の検討に重点をおいて-
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09557054
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
阿部 達也 東北大学, 加齢医学研究所, 講師 (70222651)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
菊池 利明 東北大学, 加齢医学研究所, 助手 (10280926)
八重柏 政宏 東北大学, 加齢医学研究所, 助手 (70261477)
益田 賢一 帝人株式会社, 創薬第二研究所, 主任研究員
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| Keywords | SLPI / 細菌性肺炎 / ブレオマイシン肺傷害 / HGF / 遺伝子発現 / マウス遺伝子 / プロテアーゼインヒビター |
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| Research Abstract |
1.マウスSLPI cDNAのクローニング
マウス肺poly(A)^+RNAを鋳型とし,degenerate primersを用いたRT-PCRでマウスSLPIのcDNAをクローニングした(Am.J.Respir.Crit.Care Med.156:1235-1240、1997)。
2.マウスSLPI遺伝子のクローニングとその染色体上の局在
上記cDNAをプローブとしてマウスゲノムDNAライブラリーからマウスSLPI遺伝子の全長をクローニングした(Eur.Respir.J.10:255S,1997)。その全塩基配列から,マウスのSLPI遺伝子もヒトと同様に4つのエクソンからなるほぼ同一の構造をもつことがわかった。また,in situ hybridizationにより,マウスSLPI遺伝子は染色体2Hにマップされた。
3.細菌性肺炎の肺組織中のSLPI遺伝子の発現の変化
マウスの細菌性肺炎の肺組織中でのSLPI遺伝子の発現を,マウスSLPI cDNAをプローブにしたノーザンブロットで検討した。その結果,肺組織中のSLPI mRNAは感染10時間後から約3倍に増加し,そのレベルは少なくとも感染後48時間持続した(Am.J.Respir.Crit.Care Med.156:1235-1240,1997)。この間,脾臓のSLPI mRNAのレベルは不変であり,SLPI遺伝子は炎症の場で局所的な発現調節を受けていることをin vivoで実証した。
4.ブレオマイシン(BLM)肺傷害における肺組織でのSLPI遺伝子の発現の変化
当研究室で報告した浸透圧ポンプからBLMを投与する系(Am.J.Respir.Crit.Care Med.156:1937-1944,1997)で,マウス肺組織中のSLPI mRNAの変化を3.と同じ方法で検討した。しかし,有意の変動を認めなかった。この系に関してはBLMの作用の再現性を再検討する予定である。
5.マウスSLPI組み換えタンパク作製のための発現ベクター
現在大腸菌用と動物培養細胞用のデザインを検討中である。
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[Publications] Toshiaki Kikuchi: "Cis-acting region associated with lung cell-specific expression of the secretory leukoprotease imhibitor gene" Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.17・3. 361-367 (1997)
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[Publications] Tatsuya Abe: "Bacterial pneumonia causes augmented expression of the secretory leukoprotease inhibitor gene in the murine lung" Am.J.Respir.Crit.Care Med.156・4. 1235-1240 (1997)
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[Publications] Masahiro Yaekashiwa: "Simultaneous or delayed administration of hepatocyte growth factor equally represses the fibrotic changes in murine lung injured by bleomycin" Am.J.Respir.Crit.Care Med.156・6. 1937-1944 (1997)
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[Publications] Hiroaki Mitsuhashi: "Potency of truncated secretory leukoprotease inhibitor assessed in acute lung injury models in hamsters" J.Pharmacol.Exp.Ther.282・2. 1005-1010 (1997)
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[Publications] S.Yasuoka: "Purification,characterization,and localization of a novel trypsin-like protease found in the human airway" Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.16・3. 300-308 (1997)
