自己免疫性疾患に関与する特異的B細胞破壊法の開発

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09557064
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 天谷 雅行 慶應義塾大学, 医学部, 専任講師 (90212563)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 高柳 淳 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (80245464) ; 清水 信義 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (50162706) ; 清水 宏 慶應義塾大学, 医学部, 助教授 (00146672) ; 西川 武二 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (50051579)
• Keywords: 自己免疫性疾患 / 天疱瘡 / B細胞 / 疾患特異的治療法 / 組換え毒素 / カドヘリン / デスモグレイン / 細胞接着

Research Abstract

本研究の目的は、より疾患特異性の高い副作用の少ない自己免疫性疾患に対する新しい治療法の開発を目指し、患者血中を循環する自己抗体を産生するB細胞に照準を当て、正常なB細胞を破壊することなく病的なB細胞のみを破壊する選択的除去法を開発する事である。対象疾患は、表皮接着分子であるデスモグレイン3(Dsg3)に対する自己抗体が産生される尋常性天疱瘡である。本年度は、Dsg3の細胞外領域と毒素とのキメラ分子(組換え毒素)を作製した。自己抗体産生B細胞の膜表面にはDsg3に対するイムノグロブリン受容体が発現されており、組換え毒素はDsg3部分がリガンドとなり抗原特異的にB細胞を認識できる。毒素は、Pseudomonas Exotoxin(PE40)を用いた。発現系として、PE40は真核細胞に対して毒性を持つため、大腸菌の発現系を用いた。また、可溶性を増すために、N末にはthioredoxin(TRX)を挿入した。Dsg3は、主要エピトープを含むN未1/3の相当するEC1およびEC2の約半分の領域を含むものを使用した(Dsg3ΔN1)。組換え毒素は、TRX-Dsg3ΔN1-PE40として発現させたものを、トロンビン処理によりTRXを除き、Dsg3ΔN1-PE40とした。DSg3に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞を標的細胞として、毒素活性を検討したところ、抗原特異的に約60%の細胞を除去することに成功した。本研究の成果は、抗原特異的B細胞破壊法の実用化に向けて大きく一歩前進したことになる。

Research Products

• [Publications] Hertl M, Karr Rw, Amagai M, Katz SI: "Heterogeneous MHC II restriction pattern of autoreactive desmoglein 3 specific T cell responses in pemphigus vulgaris patients and normals" J Invest Dermatol. 110. 388-392 (1998)
• [Publications] Amagai M, Nishikawa T, Nousari HC, Anhalt GJ, Hashimoto T: "Antibodies against desmoglein 3(pemphigus vulgaris antigen)are present in sera from patients with paraneoplastic pemphigus and cause acantholysis in vivo in neonatal mice" J Clin Invest. 102. 775-782 (1998)
• [Publications] Amagai M, Tsunoda K, Zillikens D, Nagai T, Nishikawa T: "The clinical phenotype of pemphigus is defined by the anti-desmoglein autoantibody profile" J Am Acad Dermatol. 40. 167-170 (1999)
• [Publications] Proby C, Fujii Y, Owaribe K, Nishikawa T, Amagai M: "Human autoantibodies against HD 1/plectin in paraneoplastic pemphigus" J Invest Dermatol. 112. 153-156 (1999)
• [Publications] Mahoney MG, Wang Z, Rothenberger KL, Koch PJ, Amagai M, Stanley JR: "Explanation for the clinical and microscopic localization of lesions in pemphigus foliaceus and vulgaris" J Clin Invest. 103. 461-468 (1999)
• [Publications] Amagai M, Komai A, Hashimoto T, Shirakata Y, Hashimoto K, Yamada T, KitajimaY, Ohya K, Iwanami H, Nishikawa T: "Usefulness of enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)using recombinant desmogleins 1 and 3 for serodiagnosis of pemphigus" Br J Dermatol. 140. 351-357 (1999)