1999 Fiscal Year Annual Research Report

遺伝子クローニングのための染色体工学システムの開発

Research Project

Project/Area Number	09557132
Research Institution	KYUSHU UNIVERSITY
Principal Investigator	加藤秀則九州大学, 生体防御医学研究所, 講師 (60214392)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	和氣徳夫九州大学, 生体防御医学研究所, 教授 (50158606) 松田貴雄九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (10304825)
Keywords	子宮内膜癌抑制遺伝子 / テロメア / D1S225-459 / 748H11 / ヒト1番染色体 / chromosome pulverization
Research Abstract	前年度で絞り込まれた領域をさらに特定するためにテロメアー繰り返し配列をもったベクターにとSTSマーカーをプライマーとして増幅したDNA断片(5〜10Kb)を組み込み、ヒト1番染色体にターゲッティングすることにより、特定のSTSマーカーより遠位側の欠失をもった1番染色体断片を作製し(Tel-STFs)、これらをHHUAへ移入し増殖ないしテロメレースの変化を分析する試みを行った。結果としては有用なTel-STFsは少数しか得られず、今後の検討課題としてa)テロメアー繰り返し配列の効果的な長さは1Kbでよいのか否か b)homologous recombinationの頻度の高いchikenDT40等の細胞にヒト1番染色体を導入したうえでターゲッティングを行い効率を上げる、等を行うこととした。Chromosome pulverizationに関して基礎的検討ではpulverizationを起こした後のA9細胞などへのキャリアー細胞への移入が効率良く行えず、この点をひきつづき検討することとした。この遺伝子座領域をさらに限局する他の方法として、内膜癌症例60例の検体を用いて、1q32-41内のSTSマーカーにより、ヘテロ接合性消失の検討を行った。D1S459-225の1Mb以下の領域に60%以上の頻度でLOHが観察され、子宮内膜癌抑制遺伝子は、このD1S459〜225の領域に存在することが明らかとなった。この領域は1Mb以下であり遺伝子クローニングが可能なところまで狭小化に成功した。次のステップとして、D1S459及び225陽性YACクローンをGenethon社から得、YACコンティグの決定を行った。これによりキメラ化していずD1S459及び225陽性YACクローンとして748H11を得た。748H11ベクターのURA領域に、G418耐性遺伝子を組み込み耐性マーカーをつけたべクターをHHUAにスフェロブラスト化とポリエチレングリコールによる細胞融合を用いて導入し、細胞死誘導活性を検討した結果79%の細胞クローンに細胞死が誘導された。さらに既存のBACライブラリーをスクリーニングし、748H11に含まれるBACクローンを得、同様にHHUAに導入すると、そのひとつにより、やはり同程度に細胞死が誘導された。

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Kato H et al: "Suprressed tumorigenecity of human endometrial cancer cells by the restored expression of DCC gene."Br.J.Cancer. 82. 459-466 (2000)
[Publications] Kaneta Y et al: "Gestational choriocarcinoma whose responsible pregnancy was a complete hydatidiform mole identified by PCR analysis with new sequence tagged site primers."Jpn J Clin Oncol. 29. 504-508 (1999)
[Publications] Zhou Y et al: "Involvement of mutations in the DPC4 promotor in endometrial carcinoma develoment."Molecular Carcinogenesis. 25. 64-72 (1999)
[Publications] 加藤秀則他: "卵巣癌と闘うために -遺伝子研究の現況-"臨床婦人科産科. 53. 782-784 (1999)
[Publications] 松田貴雄他: "8.絨毛癌の分子生物学 V.子宮体部悪性腫瘍の基礎知識"産科と婦人科. 66. 320-325 (1999)
[Publications] 和氣徳夫他: "遺伝子治療の現況と展望"日本産婦人科学会誌. 51・8. 715-724 (1999)

1999 Fiscal Year Annual Research Report

遺伝子クローニングのための染色体工学システムの開発

Principal Investigator

加藤 秀則 九州大学, 生体防御医学研究所, 講師 (60214392)

Research Products

[Publications] Kato H et al: "Suprressed tumorigenecity of human endometrial cancer cells by the restored expression of DCC gene."Br.J.Cancer. 82. 459-466 (2000)

[Publications] Kaneta Y et al: "Gestational choriocarcinoma whose responsible pregnancy was a complete hydatidiform mole identified by PCR analysis with new sequence tagged site primers."Jpn J Clin Oncol. 29. 504-508 (1999)

[Publications] Zhou Y et al: "Involvement of mutations in the DPC4 promotor in endometrial carcinoma develoment."Molecular Carcinogenesis. 25. 64-72 (1999)

[Publications] 加藤秀則 他: "卵巣癌と闘うために -遺伝子研究の現況-"臨床婦人科産科. 53. 782-784 (1999)

[Publications] 松田貴雄 他: "8.絨毛癌の分子生物学 V.子宮体部悪性腫瘍の基礎知識"産科と婦人科. 66. 320-325 (1999)

[Publications] 和氣徳夫 他: "遺伝子治療の現況と展望"日本産婦人科学会誌. 51・8. 715-724 (1999)

加藤秀則九州大学, 生体防御医学研究所, 講師 (60214392)

[Publications] 加藤秀則他: "卵巣癌と闘うために -遺伝子研究の現況-"臨床婦人科産科. 53. 782-784 (1999)

[Publications] 松田貴雄他: "8.絨毛癌の分子生物学 V.子宮体部悪性腫瘍の基礎知識"産科と婦人科. 66. 320-325 (1999)

[Publications] 和氣徳夫他: "遺伝子治療の現況と展望"日本産婦人科学会誌. 51・8. 715-724 (1999)