1999 Fiscal Year Annual Research Report
質量分析によるグリコヘモグロビンの標準定量法の確立と実用化
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09557220
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| Research Institution | Osaka Medical College |
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Principal Investigator |
清水 章 大阪医科大学, 医学部, 教授 (00028581)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
八木 雅之 株式会社京都第一科学R&D Inc, ・技術研究部, 係長
岸川 匡彦 大阪医科大学, 医学部, 助手 (40268199)
中西 豊文 大阪医科大学, 医学部, 講師 (10247843)
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| Keywords | HbA1c / 糖尿病 / 質量分析 / 国際標準測定法 / 蛋白分解酵素 / デイテクターゲイン / 固相化酵素 / 異常ヘモグロビン |
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| Research Abstract |
糖化ヘモグロビン(HbA1c)は糖尿病コントロールの指標として、近年使用頻度が高まり、正確な測定が重要視されている。1997年われわれ及びべーリングマンハイム社のコボルトらが質量分析(MS)による測定法を発表した。この方法を国際標準測定法として確立するため、共同研究が始まった。われわれは独自の普及型の下記方法を提唱し、公表した(研究発表論文は上段の2つ)。この方法は1)Hbを蛋白分解酵素Glu-Cで処理し、生じたβ鎖N末ヘキサペプチドGluc-VHLTPEとVHLTPEとの比をESIMS(positive mode)によって求める。これらのペプチドには2箇所イオン化の部位(N末とHis)があり、それぞれ1価イオンと2価イオンを生じる。両ペプチドの1価イオンと2価イオンのピーク強度を比べると、Cluc-VHLTPEのほうが2価イオンの強度が相対的に高い。使用したMS機器のディテクターゲインは、同一モル数のペプチドの1価イオンと2価イオンを比較すると、2価イオンの方が高い強度を示す。2価イオンの強度に0.5を乗じた数値に1価イオン強度を加えた値を求め、両イオン強度を比較すると、ペプチドモル比とイオン強度比が一致する事が明らかになった。Hisのイオン化効率は高く、測定条件では両ペプチドが同程度にイオン化され、N末のイオン化率に差があってGluc-NH>NH2であり、N末のみがイオン化された1価イオンはほとんどないと考えればこのデータが妥当であろう。この計算式により、HbA1cを測定した場合、最も高い再現性が得られる。2)Glu-Cの固相化酵素を用いることによって、簡便性、経済性が高まった。3)上記式によるとペプチドのモル比がイオン強度比に一致しており、再現性が高いので、測定毎に検量線を作成する必要がない。異常ヘモグロビンを含む検体でも、正確に測定できる。標準法として優れている。
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[Publications] Toyofumi Nakanishi,et al.: "Determination of ionization efficiency of glycated and non-glycated peptides from the N-terminal of hemoglobin β-chain by ESIMS."JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B. (in press). (2000)
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[Publications] Toyofumi Nakanishi,et al.: "Ratio of the Ion Peak Intensity of Glycated to Non-glycated Hexapeptides from the N-Terminal of Hemoglobin β-Chain Measured by LC-ESI Mass Spectrometry"J.MASS SPECTROM.SOC.JPN.. 47・6. 389-391 (1999)
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[Publications] Masahiko Kishikawa,et al.: "Enhanced amyloidogenicity of sulfonated transthyretin in vitro, a hypothetical etiology of senile amyloidosis"AMYLOID:INT.J.EXP.CLIN.INVEST.. 6・3. 183-186 (1999)
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[Publications] Masahiko Kishikawa,et al.: "A new amyloidogenic transthyretin variant,[D38A], detected by electrospray ionization/mass spectrometry"AMYLOID:INT.J.EXP.CLIN.INVEST.. 6・4. 278-281 (1999)
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[Publications] Ayako Miyazaki,et al.: "Compound Heterozygosity for β^+-Thalassemia[-31(A→G)]and a New Variant with Low Oxygen Affinity,Hb Sagami[β139(H17)Asn→Thr]."HEMOGLOBIN. 23・3. 267-271 (1999)
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[Publications] Toyofumi Nakanishi,et al.: "Simple and defined method to detect the SOD-1 mutants from patients with familial amyotrophic lateral sclerosis by mass spectrometry"JOURNAL OF NEUROSCIENCE METHODS. 81. 41-44 (1998)
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[Publications] Akira Shimizu,et al.: "AMYLOID AND AMYLOIDOSIS 1998"The Parthenon Publishing Group Inc.. 585 (1999)
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[Publications] Akira Shimizu,et al.: "ADVANCES IN MASS SPECTRPMETRY, VOL.14"Elsevier Science B. V.. 768 (1998)
