1997 Fiscal Year Annual Research Report
キチン結合性を有する抗真菌蛋白質の探索と構造解析及び抗真菌剤開発のための基礎研究
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09558080
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
川畑 俊一郎 九州大学, 理学部, 助教授 (90183037)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
牟田 達史 九州大学, 医学部, 講師 (60222337)
河野 敬一 北海道大学, 大学院・理学研究科, 助教授 (10136492)
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| Keywords | 抗菌蛋白質 / キチン結合蛋白質 / 先天性免疫 / 生体防御 / リポ多糖 |
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| Research Abstract |
カブトガニ血球細胞沈査から、Sephadex G-50,S-Sepharose、およびChitinを用いたカラムクロマトグラフィーにより、新規のキチン結合タンパク質を精製した。NH_2-末端配列分析の結果、当グループがすでに見い出しているTachystatinと配列類似性が見られたため、TachystatinをTachystatin A(配列によりA1,A2に分けられる)とし、新規のキチン結合タンパク質をTachystatin Bと命名した。精製したTachystatin Bは逆相HPLCにより2種のアイソタンパク質に分離され、それぞれTachystatin B1、B2(存在比3:2)とした。Tachystatin B1、B2ともに42アミノ酸残基からなり、2、3番目にアミノ酸置換が見られるほかは、同一の配列であった。配列より推定される分子量はTachystatin B1=4,912.62、Tachystatin B2=4,940.67であり、質量分析の結果と良く一致した(それぞれ4,912.69および4,941.17)。Tachystatin Bはグラム陰性菌、グラム陽性菌、真菌に対して抗菌活性を示し、特に真菌に対する抗菌活性は他のカブトガニ抗菌タンパク質と比較して非常に強かった。さらに、Tachystatin Bはリポ多糖(LPS)感作赤血球に対して溶血活性を示し、Polyethylene glycol #1540、Dextran 4などの糖により溶血が阻害されることが明らかとなった。従ってTachystatin Bは赤血球膜上のLPSと結合し、直径約2.4mmのporeを形成すると予想された。以上のことから、Tachystatin Bは、TachycitinやBig Defensinと同様にカブトガニの生体防御において重要な役割を果たしていると思われる。
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[Publications] Kazunori Nakagawa: "Tissue distribution and subcellular localization of rabbit liver metallocndopeptidase." Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 45. 41-47 (1997)
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[Publications] Shun-ichiro Kawabata: "cDNA cloning,tissue distribution,and subcellular localization of horseshoe crab big defensin." Biolgical Chemistry Hoppe-Seyler. 378. 289-292 (1997)
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[Publications] Kwon,T.H.,Lee: "Purification and characterization of prophenoloxidase from the hemolymph of coleopteran insect,Holotrichia diomphalia Larvae." Molecular Cells. 7. 90-97 (1997)
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[Publications] Tetsu Saito: "A newly identified horseshoe crab lectin with binding specificify to O-antigen of bacterial lipopolysaccharides." Journal of Biological Chemistry. 272. 30703-30708 (1997)
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[Publications] Sadaaki Iwanaga: "New types of clotting factors and defense molecules found in horseshoe crab hemolymph:Their structures and functions." Journal of Biochemistry. 123. 1-15 (1998)
