1998 Fiscal Year Annual Research Report
硫酸化グリコサミノグリカン糖鎖の普遍的シークエンシング法の開発
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09558082
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| Research Institution | Kobe Pharmaceutical University |
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Principal Investigator |
菅原 一幸 神戸薬科大学, 薬学部, 教授 (60154449)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
吉田 圭一 生化学工業株式会社, 東京研究所, 主席研究員
木下 亜希子 神戸薬科大学, 薬学部, 助手 (30289037)
山田 修平 神戸薬科大学, 薬学部, 助手 (70240017)
北川 裕之 神戸薬科大学, 薬学部, 講師 (40221915)
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| Keywords | ヘパリン / ヘパリナーゼ / コンドロイチナーゼC / デルマタン硫酸 / 硫酸化オリゴ糖 / マンノサミン / C2-エピメリゼーション / NMR |
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| Research Abstract |
(1) ヘパリンをバクテリアのエリミナーゼで分解して得た不飽和二糖が、アルカリ性水溶液中で、非酵素的に のC2-エピメリゼーションによってマンノサミンに変化することを見い出した。
(2) ブタ小腸由来のヘパリンオリゴ糖標品中にデルマタン硫酸由来の硫酸化四糖と六糖を見い出し、-3GalNAc(4,6-disulfated)βl-4IdoAα1-という珍しい二糖単位を含む、新規の配列を見い出した。
(3) ブタ小腸由来のヘパリンをヘパリナーゼで消化して断片化して得た硫酸化八糖の構造をプロトンNMRで解析することによって決定した。その結果、硫酸化パターンとプロトンのケミカルシフト値の間に密接な関係があることを見い出した。
(4) バクテリア由来のコンドロイチナーゼCはコンドロイチン硫酸やデルマタン硫酸の構造解析の重要なツールとなることが期待される。バクテリア由来のコンドロイチナーゼCを、当研究室でプロテオグリカンも糖とタンパク質との結合領域から単離した様々な硫酸化Glycoserineに作用させることによって、結合領域に対する基質特異性を明らかにした。
(5) すでに当研究室で構造を決定した標識硫酸化オリゴ糖をモデル化合物として2-aminobenzamideで蛍光標識し、標識誘導体をまずバクテリア由来のコンドロイチンナーゼ、ヘパリチナーゼ、スルファターゼなどを用いて消化し、消化物のHPLC分析、ゲル電気泳動分析によりシークエンシングを実施し、酵素消化、HPLC、電気泳動の至適条件を決定することが出来た。
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[Publications] 山田 修平: "Conversion of N-sulfated glucosamine to N-sulfated mannosamine in an unsaturated heparin deiaccharide by non-enzymatic,base-catalyzad C-2 epimerization during enzymatic" Carbohyd.Res.309(3). 261-268 (1998)
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[Publications] 山田 修平: "Structural determination of sulfated tetra-and hexasaccharides containing a rare disaccharide sequence,-3GalNAc(4,6-disulfated)β1-4IdoAα1-,isolated from porcineintestinal dermatan sulfate" Eur.J.Biochem.258(2). 775-783 (1998)
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[Publications] 山田 修平: "Structural studies of the octasaccharides derived from the low sulfated region of porcine intestinal heparin:construction of the 1H-NMR data based of heparin oligosaccharides and systematic investigation of the effects of saccharide sequences on proton resonances" Biochemistry. 38(2). 838-847 (1999)
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[Publications] 木下 亜希子: "Microanalysis of glycosaminoglycan-derived oligosaccharides labeled with the fluorophore 2-aminobenzamide by high-performance liquid chromatography:Application to disaccharide composition analysis and exo-sequencing of oligosaccharides" Anal.Biochem.(印刷中). (1999)
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[Publications] 津田 博美: "Substrate specificity studies of flavobacterium chondroitinase C and heparitinases towards the glycosaminoglycan-protein linkage region:Use of a sensitive analytical method developed by chromophore labeling of linkage glycoserines using dimethylaminoazobenzenesulfonyl chloride" Eur.J.Biochem.(印刷中). (1999)
