1998 Fiscal Year Annual Research Report
トポイソメラーゼの特定機能領域阻害による細胞増殖、核構造への影響と新阻害剤の開発
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09558095
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
菊池 韶彦 名古屋大学, 医学部, 教授 (40283428)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田中 眞人 三菱化学, 生命科学研究所, 主任研究員
紅 朋浩 名古屋大学, 医学部, 助手 (00222513)
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| Keywords | DNAポイソメラーゼ / モノクロン抗体 / 活性阻害 / 核移行シグナル / 種特異性 / エピトープ / クリーバブル・コンプレックス / 大腸菌による発現 |
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| Research Abstract |
1。 抗DNAトポイソメラーゼIIαに対するモノクロン抗体のエピトープ解析
100種をこえるDNAトポイソメラーゼIIαに対するモノクロン抗体から、DNAトポイソメラーゼのサブドメインのうちT2(ATPase)、T5(機能未定)、P9(切断・再結合)、P12(機能未定)に反応する代表的ないくつかを選びオリゴペプチドのレベルでエピトープを決め、in vitroでの抗体の作用とin vivoでの作用を比較した。特にT5、P9の領域はDNAとたんぱくが接触している部分を含むので、この部分をエピトープにもつ抗体がDNAトポイソメラーゼ活性を阻害する可能性を検討した。
核移行シグナルと高い種特異性を示すC末端部分に相当するQ領域については、ヒトDNAトポイソメラーゼIIαに対する代表的なモノクロン抗体8D2を選び、更に詳細なエピトープのマッピングをした。
2。 DNAトポイソメラーゼに結合するDNAトポイソメラーゼ断片の作用。
ヒトDNAトポイソメラーゼIIαの様々な断片を大腸菌に発現させ可溶化したところ、T5領域に相当する断片がDNAトポイソメラーゼと強く結合し、その活性を阻害することを見いだした。この結合は、いわゆるクリーバブル・コンプレックスの形成を阻害しないことから新しいタイプの作用と考えられ、その反応様式を検討した。この阻害反応からT5領域の役割を推測できるのではないかと考えている。
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[Publications] K.TANOGUCHI et al.: "immunohistochemical and two-parameter flow cytometric studies of DNA topoisomerase II α in human epithelial ovaliam carcinoma and germ cell tumor" Modern Pathology. 11. 186-193 (1998)
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[Publications] K.SUGIMOTO et al.: "Temporal and spatial distribution of DNA topoisomerase II alters during proliferation,differenciation and apoptosis in HL-60 cells" Blood. 91. 1407-1417 (1998)
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[Publications] S.KATO and A.KIKUCHI: ""DNA Topoisomerase : The key enzyme that regulates DNA super structure" Nagoya Journal of Medical Sciences. 61. 11-26 (1998)
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[Publications] K.NAGATA et al.: "Cellular localization and expression of template-activating factor I in different cell types" Experimental Cell Research. 240. 274-281 (1998)
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[Publications] K.YODA et al.: ""In vitro assembly of the CENP-B/a-satellite DNA/core histone complex:CENP-B causes nucleosome positioning" Genes to Cells. 3. 533-548 (1998)
