1997 Fiscal Year Annual Research Report
p53遺伝子の変異した肝癌を標的とした遺伝子治療ベクターの開発
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09558096
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| Research Institution | Japanese Foundation For Cancer Research |
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Principal Investigator |
小池 克郎 財団法人癌研究會, 癌研究所・遺伝子研究施設部, 部長 (30085625)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
橋本 修一 明治乳業ヘルスサイエンス研究所, 課長研究員
林 恭行 財団法人癌研究會, 癌研究所・遺伝子研究施設部, 研究員 (90198862)
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| Keywords | 癌抑制遺伝子p53 / ヒト肝癌 / 遺伝子治療ベクター / HBV X遺伝子 / アデノウイルスタイプ5 / M4プロモーター / アポトーシス / 転写カセット |
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| Research Abstract |
日本人の肝癌では、癌抑制遺伝子p53が変異したものが30%前後あることが報告されている。本研究は、このp53遺伝子が変異したヒト肝癌を標的とした遺伝子治療ベクターの開発を目的としている。その為に、p53遺伝子が変異した細胞でのみ増殖できるようにしたアデノウイルス(Ad)と、p53遺伝子が変異した肝癌細胞でのみ高発現するHBV X遺伝子のプロモーター/エンハンサーを組合せ、その目的を達成させるべく研究を行った。
アデノウイルスタイプ5(Ad5)ゲノムのサイズは約35kbであり、初期遺伝子と後期遺伝子を持ち、それぞれがゲノム複製とウイルス粒子形成に関与している。Ad5ベクターについては、E3或いはE1又はE4領域に欠損変異を持ったAd5 DNAをヒト293細胞にトランスフェクションして作成した。
我々の研究から、HBVのX遺伝子のM4プロモーターは、p53遺伝子が正常な肝細胞では殆ど発現せず、p53遺伝子が変異した肝細胞でのみ著しく発現することが分かった。このM4プロモーターの下流に細胞のアポトーシスに関係している遺伝子を挿入して発現させれば、p53遺伝子の変異した肝癌細胞がアポトーシスに至ることが期待される。そこで、このM4プロモーターを用いた転写カセットを作成し、この転写カセットをAd5 DNA中のE3或いはE1領域に挿入することを試みた。現在、p53遺伝子が正常の細胞(HepG2やNIH3T3)およびp53遺伝子が変異した細胞(HuH7)を用いた感染実験を行っている。
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[Publications] T.Urashima,et al.: "Identification of hepatitis B virus integration in hepatitis C virus-infected hepatocellular carcinoma tissues." J.Hepatology. 26. 771-778 (1997)
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[Publications] S.Ishida,et al.: "Isolation and analysis of cellular DNA fragments directly binding to c-Myc protein." Leukemia. 11. 399-401 (1997)
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[Publications] M.Naito,et al.: "Simple method for efficient production of hepatitis B virus core antigen in Escherichia coli." Res.Virol.4. 299-305 (1997)
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[Publications] T.Shimazu,et al.: "Transcriptional activation of the human c-myc gene by simian virus 40 large T antigen without binding to p53 and RB proteins in the transient expression system." Biocem.Biophys.Res.Comm.235. 153-157 (1997)
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[Publications] K.Fukai,et al.: "Characterization of a specific region in the hepatitis B virus enhancer I for the efficient expression of X gene in the hepatic cell." Virology. 236. 279-287 (1997)
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[Publications] N.Nakamichi,et al.: "Structure and expression of integrated hepatitis B viruse genes in an HBs antigen producing human cell line(huGK-14)." Cytotechnology. 25. 59-68 (1997)
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[Publications] S.Takada,et al.: "Cytoplasmic retention of the p53 tumor suppressor gene product is observed in the hepatitis B virus X gene-transfected cells" Oncogene. 15. 1895-1901 (1997)
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[Publications] Y.Hayashi,et al.: "Ccal is required for formation of growth-arrested confluent monolayer of rat 3Y1 cells." J.Biol.Chem.272. 18082-18086 (1997)
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[Publications] Y.Hayashi,et al.: "Isolation of a novel cDNA whose corresponding mRNA is accumulated in growth-arrested confluent but not in growing sub-confluent rat 3Y1 cells." Biochim.Biopys.Acta. 1352. 145-150 (1997)
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[Publications] N.Nakamichi,et al.: "Characterization of an antigen-producing cell line huGK-14 at the molecular level." Animal Cell Technology:Basic&Applied aspects.9. 51-57 (1998)
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[Publications] T.Kiyono,et al.: "Binding of high-risk human papilloma virus E6 oncoproteins to the human homologue of the Drosophila discs large tumor suppressor protein." Porc.Natl.Acad.Sci.USA. 94. 11612-11616 (1997)
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[Publications] Y.Hayashi,et al.: "Cca3,the mRNA level of which transiently decreases before initiation of DNA synthesis in regenerating rat liver cells." FEBS Letters. 406. 147-150 (1997)
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[Publications] M.Watanabe,et al.: "Gene transfection of mouse primordial germ cells in vitro and analysis of their survival and growth control." Exp.Cell Res.230. 76-83 (1997)
