1997 Fiscal Year Annual Research Report
ペプチドを用いる特異的溶離による生理活性タンパク質の高品位精製
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09650873
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Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Kobe University |
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Principal Investigator |
加藤 滋雄 神戸大学, 工学部, 教授 (20026272)
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| Keywords | タンパク質分離 / アフィニティクロマトグラフィー / 抗ペプチド抗体 / 特異的溶離 |
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| Research Abstract |
生理活性タンパク質は製品の活性が重要であり、またきわめて高い純度が要求される。このような生理活性タンパク質を極めて穏和な条件下で、その活性に全く影響を与えず溶離するため、免疫アフィニティ抗体リガンドの設計と、特異的な溶離法の開発を行うことを目的とした。すなわち、タンパク質の特定部位と結合する抗ペプチド抗体をリガンドとし、その結合を抗原として用いたペプチドを含む液によって競合的に溶離し、生理活性タンパク質の安定な条件から変えることなく分離する新しい手法を開発する。
平成9年度に得られた研究成果は以下のようである。
1.酵母分泌生産イネα-アミラーゼ、ヒトCD2タンパク質およびインスリンを対象とし、これらのC末端のアミノ酸配列に相当するペプチドを合成し、これを抗原として免役して得た抗ペプチド抗体の抗原ペプチド、および対象タンパク質のアフィニティ吸着特性を検討した。その結果これらの抗ペプチド抗体は抗原ペプチドはもちろん、対照タンパク質ともアフィニティ精製に充分な強度で結合することが明らかとなった。また、抗原ペプチドに類似した数々なペプチドを合成し、これらと取得抗ペプチド抗体との相互作用を検討し、抗体認識部位と吸着特性の関連を明らかにした。
2.この抗体を固定化したカラムでイネα-アミラーゼおよびインスリンを吸着し、これを抗原として用いたペプチドによって特異的に競合溶離することができた。この実験によっペプチド濃度はあまり溶離特性に影響しないことが明らかとなった。また、溶離されたタンパク質はpH変化やイオン強度変化による非特異的溶離の場合と比べて、高活性・高純度であった。
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