1997 Fiscal Year Annual Research Report

細胞内ATPセンサーを介した新しいシグナル伝達機構の解明

Research Project

Project/Area Number	09660086
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Research Institution	Kyoto University
Principal Investigator	植田和光京都大学, 農学研究科, 助手 (10151789)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	木岡紀幸京都大学, 農学研究科, 助手 (90234179)
Keywords	ABCス-パファミリー / トランスポーター / k^+チャネル / 多剤耐性 / 癌 / 糖尿病 / 分子生物学 / 生化学
Research Abstract	ABCスーパーファミリー蛋白(ABC蛋白)は、MDR1,MDR2,MRP,MOAT,CFTR,SUR1,SUR2などであり、1分子内に12から18の膜貫通部位と2つのよく保存されたATP結合領域をもつ。これらは皆ATPによって駆動あるいは制御されるが、それらの機能はポンプ、フリッパーゼ、チャネル、チャネル・レギュレーターと多様である。本研究では、SUR1、SUR2、MDR1、MRPを精製し、それぞれのATP加水分解反応を比較することによって、ABC蛋白が細胞環境をモニターするシグナル分子としてATPをいかに利用し、あるいはATPによって駆動されているか解明を試みた。まず、それぞれのABC蛋白のATP加水分解領域に変異を導入し、光親和標識できるヌクレオチドを用いて、ATP結合、ATP加水分解を検討した。その結果、2つのヌクレオチド結合領域は、独立にATPを加水分解するのではなく、厳密に協調しあっていることが明らかになった。つまり、片方が常に加水分解反応をし、もう片方が常に制御部位として働いているわけではなく、反応と制御を順番に行っていると考えられる。SUR1は、前半のヌクレオチド結合部位はMgATPを強く結合し、後半のヌクレオチド結合部位はMgADPを結合すること、2つのヌクレオチド結合部位は互いに協調して機能していることが明らかになった。さらにHis TagをC末端に融合したMDR1、MRP、SURを培養細胞内で大量発生させ、精製することに成功した。

Research Products

(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Ueda,K.: "MgADP antagonism to the Mg-independent ATP binding of the sulfonylurea receptor SURI." J.Biol.Chem.272. 22983-22986 (1997)
[Publications] Taguchi,Y.: "Alteration of Substrate Specificity by Mutations at the His6l Position in Predicted Transmembrane Domain 1 of Human MDR1/P-glycoprotein." Biochemistry. 36. 8883-8889 (1997)
[Publications] Miwa,A.: "Protein kinase C-independent correlation between P-glycoprotein expression and volume sensitivity of Cl^channel." J.Membrane Biol.157. 63-69 (1997)
[Publications] Taguchi,Y.: "Anti-cancer drugs and glutathione stimulate vanadate-induced trapping of nucleotide in multidrug resistance-associated protein(MRP)." FEBS Lett.401. 11-14 (1997)
[Publications] Taguchi,Y.: "Amino acid substitutions in the first transmembrane domain(TMl)of P-glycoptotein alter substrate specificity." FEBS Lett.413. 142-146 (1997)
[Publications] Tanaka,K.: "Relationship between expression level of P-glycoprotein and daunorubicin tansport in LLC-PKl cells transfected with human MDRl gene." Biochem.Phamacol.53. 741-746 (1997)
[Publications] Ueda,K.: "Seminars in Cancer Biology.vol 8" Academic Press, 213 (1997)

1997 Fiscal Year Annual Research Report

細胞内ATPセンサーを介した新しいシグナル伝達機構の解明

Principal Investigator

植田 和光 京都大学, 農学研究科, 助手 (10151789)

Research Products

[Publications] Ueda,K.: "MgADP antagonism to the Mg-independent ATP binding of the sulfonylurea receptor SURI." J.Biol.Chem.272. 22983-22986 (1997)

[Publications] Taguchi,Y.: "Alteration of Substrate Specificity by Mutations at the His6l Position in Predicted Transmembrane Domain 1 of Human MDR1/P-glycoprotein." Biochemistry. 36. 8883-8889 (1997)

[Publications] Miwa,A.: "Protein kinase C-independent correlation between P-glycoprotein expression and volume sensitivity of Cl^channel." J.Membrane Biol.157. 63-69 (1997)

[Publications] Taguchi,Y.: "Anti-cancer drugs and glutathione stimulate vanadate-induced trapping of nucleotide in multidrug resistance-associated protein(MRP)." FEBS Lett.401. 11-14 (1997)

[Publications] Taguchi,Y.: "Amino acid substitutions in the first transmembrane domain(TMl)of P-glycoptotein alter substrate specificity." FEBS Lett.413. 142-146 (1997)

[Publications] Tanaka,K.: "Relationship between expression level of P-glycoprotein and daunorubicin tansport in LLC-PKl cells transfected with human MDRl gene." Biochem.Phamacol.53. 741-746 (1997)

[Publications] Ueda,K.: "Seminars in Cancer Biology.vol 8" Academic Press, 213 (1997)

植田和光京都大学, 農学研究科, 助手 (10151789)