1998 Fiscal Year Annual Research Report

微生物由来新規カルボキシルプロテアーゼの構造機能解析と分子進化

Research Project

Project/Area Number	09660089
Research Institution	Faculty of Textile Science, Kyoto Institute of Technology
Principal Investigator	小田耕平京都工芸繊維大学, 繊維学部, 教授 (50081584)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	平賀和三京都工芸繊維大学, 繊維学部, 助手 (50252549)
Keywords	微生物 / カルボキシルプロテアーゼ / アスパルティックプロテアーゼ / 構造と機能 / 分子進化 / 触媒残基 / ペプスタチン / 酸性プロテアーゼ
Research Abstract	原核生物由来の最初のカルボキシルプロテアーゼ(CP)であり,且つ,ペプスタチン非感受性CPであるPseudomonas sp.(PCP)とXanthomonas sp.(XCP)の酵素を始め,Bacillus coagulans J-4酵素,高温細菌由来CP,クマモリシンの合計4種類の酵素を対象に,これらCPの構造と機能を総合的に考察する。更に,CPの進化を考察すると共に,CPの全体像を探る。 1. 触媒残基の同定(部位特異的改変体) PCPとXCPの両酵素に保存されている8ヶのAsp又はGlu残基を触媒残基の候補として,これらのAla改変体(合計16種)について検討した結果,PCPの触媒残基はAsp 170とAsp 328,XCPのそれはAsp 169とAsp 348と同定した。 2. 触媒残基の同定(スチレンオキシド) スチレンオキシドの^<14>C標識化合物を用いて検討し,PCPのGlu 80,XCPのGlu 75とAsp 110は基質結合部位として重要であることを明らかにした。 3. 触媒残基の同定(カルポジイミド) 特異的阻害剤チロスタチンと^<14>C-N,N〓-ジシクロへキシルカルポジイミドの併用によるDifferential Labelingを行い,PCPのAsp 140とGlu 222,XCPのGlu 235は触媒残基としてではなく,基質結合部位として重要であることを明らかにした。 4. Bacillus sp.J-4 CP遺伝子のクローニングペプスタチン非感受性で,且つ,アルコール耐性の本酵素について遺伝子のクローニングを行い,ほぼ全領域の遺伝子の取得に成功した。 5. クマモリシンの高発現系の確立耐熱性酵素クマモリシンの大腸菌での高発現系の構築に成功した。

Research Products

(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] S.Narutaki: "Subsite preferences of pepstatin-insensitive carboxyl proteinases from bacteria" J.Biochem.,. 125・1. 75-81 (1999)
[Publications] M.Ito: "Identification of carboxyl residues in pepstatin-insensi-tive carboxyl proteinase from Pseudomonas sp.101 that participate in catalysis and substrate binding" J.Biochem.125・1. 210-216 (1999)
[Publications] 小田耕平: "LINCL病の原因遺伝子はシュードモナスのプロテアーゼ・ホモログ" バイオサイエンスとインダストリー. 156・12. 31-32 (1998)
[Publications] M.Shibata,: "Substrate specificity of pepstatin-insensitive carboxyl proteinase from Bacillus coagulans J-4" J.Biochem.,. 124・3. 642-647 (1998)
[Publications] H.Kondo,: "Substrate specificities and kinetic properties of protei-nase A from Yeast Saccharomyces cerevisiae and the development of a novel substrate" J.Biochem.,. 124・1. 141-147 (1998)
[Publications] N.Oda,: "Nucleotide Sequence of the gene encoding the precursor protein of pepstatin-insensitive acid protease B, Scytali-dopepsin B, from Scytalidium lignicolum" Biosci.Biotech.Biochem.,. 62・8. 1637-1639 (1998)
[Publications] K.Oda: "Handbook of Proteolytic Enzymes" A.J.Barrett et al., ed. Academic Press, 4 (1998)
[Publications] K.Oda: "Aspartic Proteinases" M.James ed., Plenum Press, New York, 5 (1998)

1998 Fiscal Year Annual Research Report

微生物由来新規カルボキシルプロテアーゼの構造機能解析と分子進化

Principal Investigator

小田 耕平 京都工芸繊維大学, 繊維学部, 教授 (50081584)

Research Products

[Publications] S.Narutaki: "Subsite preferences of pepstatin-insensitive carboxyl proteinases from bacteria" J.Biochem.,. 125・1. 75-81 (1999)

[Publications] M.Ito: "Identification of carboxyl residues in pepstatin-insensi-tive carboxyl proteinase from Pseudomonas sp.101 that participate in catalysis and substrate binding" J.Biochem.125・1. 210-216 (1999)

[Publications] 小田耕平: "LINCL病の原因遺伝子はシュードモナスのプロテアーゼ・ホモログ" バイオサイエンスとインダストリー. 156・12. 31-32 (1998)

[Publications] M.Shibata,: "Substrate specificity of pepstatin-insensitive carboxyl proteinase from Bacillus coagulans J-4" J.Biochem.,. 124・3. 642-647 (1998)

[Publications] H.Kondo,: "Substrate specificities and kinetic properties of protei-nase A from Yeast Saccharomyces cerevisiae and the development of a novel substrate" J.Biochem.,. 124・1. 141-147 (1998)

[Publications] N.Oda,: "Nucleotide Sequence of the gene encoding the precursor protein of pepstatin-insensitive acid protease B, Scytali-dopepsin B, from Scytalidium lignicolum" Biosci.Biotech.Biochem.,. 62・8. 1637-1639 (1998)

[Publications] K.Oda: "Handbook of Proteolytic Enzymes" A.J.Barrett et al., ed. Academic Press, 4 (1998)

[Publications] K.Oda: "Aspartic Proteinases" M.James ed., Plenum Press, New York, 5 (1998)

小田耕平京都工芸繊維大学, 繊維学部, 教授 (50081584)