1998 Fiscal Year Annual Research Report
微生物の生産するヒロデキストリン, セロビオースホスラーゼの利用
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09660101
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| Research Institution | Osaka Prefecture University |
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Principal Investigator |
荒井 基夫 大阪府立大学, 農学部, 教授 (80081537)
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| Keywords | ホスホリラーゼ / セロビオース / セロデキストリン / Clostridium |
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| Research Abstract |
セロビオース及びセロデキストリンホスホリラーゼはセロビオース及びセロデキストリンを加リン酸分解してグルコース1リン酸を生成する酵素である.未だ完全な精製例が無いClostridium thermocellumセロビオース及びセロデキストリンホスホリラーゼの精製を行い,それぞれの電気泳動的に均一に分取することに成功した.さらに,セロデキストリンホスホリラーゼ遺伝子をクローニングをし,大腸菌における発現にも成功した.発現量は実にClostridium thermocellumの400倍であった.ついで,本菌のセロビオースホスホリラーゼ遺伝子のクローニングと遺伝子の大腸菌における発現を行ったところ,高発現に成功した.発現量は実にClostridium thermocellumの30倍であった.ついで,両酵素を大腸菌で大量発現させ,精製酵素を得た.これらの酵素とポテトα-グルカンホスホリラーゼを組み合わせ,澱粉からセロオリゴ糖の生産を試みたところ,収率25%以上でオリゴ糖を得た.P-ニトロ-β-グルコピラノシドをアクセプターとしてグルコース1リン酸を用いてグルコースの付加を試みたところ,P-ニトロ-フェニル基を還元末端部分にもつ一連のセロオリゴ糖を得た.また,放射線グルコースをアクセプターとして,グルコース1リン酸を用いてグルコースの付加を試みたところ,還元末端に持つセロオリゴ糖の合成にも成功した.これらは,セルラーゼの酵素反応の解析に極めて有効と考えられる.すなわち,酵素切断部位を明確に知ることができる.
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[Publications] T.Kawaguchi et al: "Cloning, Nucleotide Seguence, and Expression of Clostridium thermocellum Cellodextrin Phosphorylase and Its Application of Synthesis…" J.Ferment.Bioeng. 85. 144-149 (1998)
