1998 Fiscal Year Annual Research Report
凍結割断レプリカ免疫標識法による膜チャンネルとトランスポーターの動態解析
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09670008
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| Research Institution | KYOTO UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
藤本 和 京都大学, 医学研究科, 講師 (50159125)
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| Keywords | チャンネル / 細胞膜 / 電子顕微鏡 / フリーズフラクチャー / 免疫標識 / アストロサイト |
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| Research Abstract |
細胞内あるいは細胞内から外へのイオンや糖などの物質の移動は,細胞膜に存在するイオンポンプ,チャンネルやトランスポーターによって受動的あるいは能動的に行われている.通常,これらのポンプやチャンネルは恒常的に細胞膜に存在し,ホルモンなどのリガンド刺激によって,活性化され,ポンプによって細胞内からイオンがくみ出されたり,チャンネルが開き,イオンが通過できるようになる.しかし,通常は細胞内に存在する膜小胞の膜に存在し,刺激に応じて,この小胞膜が細胞膜に融合することによって,細胞膜に組み込まれ,その機能を発現するチャンネルやトランスルポーターも存在することが知られている.代表的なものとしては,インシュリン感受性のグルコーストランスポーターや水チャンネルであるアクアポリン(aquaporin,AQP)がある.
最近,私たちは通常の方法で作成した凍結割断プラチナカーボンレプリカ膜を免疫コロイド金標識する方法を考案し,良好な結果を得ている.本申請研究では,小胞星状膠細胞(アストロサイト)における水チャンネル,アクアポリン(aquaporin)の動態を凍結割断レプリカ免疫標識法で観察し,この分子の動態や機能にグルタミン酸受容体が密接に金入していることを明らかにした.
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[Publications] Fujimoto,K.et al.: "A simple and reliable quick-freezing/freezu-fracturing procedure." Histochem.Cell Biol.107. 81-84 (1997)
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[Publications] Fujimoto,K.: "SDS-digested freeze-fracture replica labeling electron microscopy to study the two-dimensional distribution of integral membrane proteins and phospholipids in biomembranes:practical procedure,interpretation and application." Histochem.Cell Biol.107. 87-96 (1997)
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[Publications] Fujimoto,K.: "Immunoelectron microscopy of protein kinase C in resting and phagocytosing macrophages." Acta histochem.cytochem.30. 105-111 (1997)
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[Publications] Fujimoto,K.: "Dynamics of connexins,E-cadherin and a-catenin on cell membranes during gap junction formation." J.Cell Sci.110. 311-322 (1997)
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[Publications] 藤本 和: "SDS処理凍結割断レプリカ標識法-補講-:急速凍結/凍結割断法、ならびに膜蛋白質のトポロジー解析と膜・リン脂質の検出について" 電子顕微鏡. 32. 48-51 (1997)
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[Publications] Fujimoto,K.: "Immuno-labeling of freeze-fracture replica." Micron. (in press). (1999)
