1998 Fiscal Year Annual Research Report
ラット胎生期における活性酸素関連遺伝子の制御…whole-mount in situ ハイブリダイゼーション法による観察
| Project/Area Number |
09670013
|
|---|
| Research Institution | Okayama University |
|---|
Principal Investigator |
野村 貴子 岡山大学, 医学部, 助手 (20116437)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山田 輝夫 岡山大学, 医学部, 助手 (00033225)
佐々木 順造 岡山大学, 医学部, 教授 (30093686)
|
|---|
| Keywords | whole-mount / in situ ハイブリダイゼーション法 / 胎生 / 活性酸素 / PHGPx / 合成プローブ / ジゴキシゲニン / 精巣 |
|---|
| Research Abstract |
活性酸素関連分子種の遺伝子発現をwhole-mount in situハイブリダイゼーション法を用いて観察することにより、胎生期のラット及びマウスにおける活性酸素関連分子の細胞内代謝における役割を検索するための実験を行った。まず、in situハイブリダイゼーション法に必要な合成オリゴヌクレオチドプローブを作製するにあたり、放射性(^<35>S)、非放射性(ジゴキシゲニン)のマーカー分子を多標識するプローブ合成法を確立した。すなわち、論文に報告されたcDNAから、93-merのセンスおよびアンチセンスの配列を選び、その両端に5'リン酸化したEcoRI/HindIIIのcohesive ends(付着末端)をもたせた合計99-mer長の合成DNAの凍結乾燥品を得て、これをもとにセンスまたはアンチセンスプローブの合成用鋳型DNAを作成する方法である。この方法により、多くの標識が挿入され、高感度での検出が可能となった。
活性酸素関連酵素の1種であるグルタチオンペルオキシダーゼ(GPx)は過酸化水素および過酸化脂質を消去する酵素であり、このうち、phospholipid hydorperoxide GPx(PHGPx)は生体膜を構成するリン脂質の過酸化物を還元消去することが出来る。今回、上述の方法でラットPHGPxのプローブを作製し、生殖器における発現を観察したところ、卵巣における発現はほとんど観察されなかったが、精巣で強い発現が観察された。この発現は、生後精巣の精細管内で、精子が形成される過程(ステップ7-11の精子細胞を中心に)で観察された。摘出した精巣を用いてwhole-mount in situハイブリダイゼーション法を行い、精細管全体での発現を観察した。胎生期での発現は現在のところ観察されていない。この発現は、活性酸素分子種の消去のみならず、精子形成に役割を持つことが示唆された。
|
-
[Publications] Sasaki J: "Multiple-labeling of oligonucleotide probes for in situ hybridization." Acta Histochem Cytochem. 31・4. 275-279 (1998)
-
[Publications] Yamamoto H: "Ultrastructural and histochemical changes and apoptosis of inner enamel epithelium in rat enamel-free area." J Craniofac Genet Dev Biol. 18. 44-50 (1998)
-
[Publications] Nishizaki K: "Programmed cell death in the development of the mouse external auditory canal." Anat Rec. 252. 378-382 (1998)
-
[Publications] Kashiwagi A: "Thyroxine enhancement and the role of reactive oxygen species in tadpole tail apoptosis." Free Radical Biology & Medicine. (印刷中). (1999)
-
[Publications] Orita Y: "Does TUNEL staining during peri-and postnatal development of the mouse inner ear indicate apoptosis?" Acta Otolaryngol (Stockh). (印刷中). (1999)
-
[Publications] 佐々木順造: "排卵と微量元素" Biomed Res Trace Elements. (印刷中). (1999)
-
[Publications] 柏木昭彦: "生命誕生と生物の生存戦略(井上正康、内海耕慥編)" 日本アクセル・シュプリンガー出版, 185 (1998)
