1998 Fiscal Year Annual Research Report
クローン化されたN型カルシウムチャンネルの電気生理学的特性の研究
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09670063
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| Research Institution | Okazaki National Research Institutes |
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Principal Investigator |
若森 実 岡崎国立共同研究機構, 生理学研究所, 助手 (50222401)
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| Keywords | チャンネル / カルシウム / パッチクランプ / ω-conotoxin GVIA |
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| Research Abstract |
昨年、Cdはbaby hamster kidneシ(BHK)cellに発現させたα_<1B>(N型)Caチャンネルに対しopen channel blockを起こし、その結合部位はチャンネルポアの外側の開口部付近にある可能性を報告した。Cdはα_<1A>(P型)Caチャンネルに対しても同様の作用を持つことが判明したので、本年度は、Cdの結合部位を明らかにする為に、α_<1A>チャンネルのリピートIIIとIVのポア領域内のグルタミン酸残基をリシン残基に置換したミュータントチャンネルを作製した。現在、BHK cellへの発現を試みているが、電気生理学的解析に十分な電流量を得ていない為、リシン残基の代わりにグルタミン残基に置換したミュータントチャンネルを作製しているところである。
急性単離神経細胞や培養神経細胞に於いて、シングルチャンネル記録で開口確率の異なる開口状態(モード)が存在することが報告されている。モード変化の分子機序にCaチャンネル副サブユニットが関与していると言う作業仮説を立て、これを検証する為に、アフリカツメガエル卵母細胞にα_<1A>、α_<1A>+α_2、α_<1A>+β、α_<1A>+α_2+βの組み合せでチャンネルを発現させ、シングルチャンネル記録を行った。α_<1A>+α_2では開時間が短く開確率の低いモードが、α_<1A>+βでは開時間の長い開確率の高いモードが記録できた。α_<1A>及びα_<1A>+α_2+βでは中間的モードが記録できた。この様に、副サブユニットの組み合せがモードの分子的基礎となっていることが判明した。しかし、神経細胞に於いて副サブユニットの結合/解離が秒単位で起こるとは考え難いので、モード変化を起こす分子を探索する必要がある。G蛋白質や各種キナーゼがモード変化を起こす可能性を検討して行きたい。
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[Publications] Wakamori Minoru: "Functional characterization of ion permeation pathway in the N-type Ca^<2+> channel" Journal of Neurophysiology. 79. 622-634 (1998)
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[Publications] Wakamori Minoru: "Halothane increases open probability of glycine-activated channel current in rat central neurones" British Journal of Anaesthesia. 80. 840-842 (1998)
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[Publications] Okada Takaharu: "Molecular cloning and functional characterization of a novel receptor-activated TRP Ca^<2+> channel from mouse brain" Journal of Biological Chemistry. 273. 10279-10287 (1998)
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[Publications] Mori Yasuo: "TRP subtypes are responsible for capacitive calcium entry in distinct mouse brain neurons" NeuroReport. 9. 507-515 (1998)
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[Publications] Furukawa Taiji: "Differential interactions of the C terminus and the cytoplasmic I-II Loop of neuronal Ca^<2+> channels with G-protein α and βγ subunits.I.molecular determination" Journal of Biological Chemistry. 273. 17585-17594 (1998)
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[Publications] Wakamori Minoru: "Single tottering mutations responsible for the P-type calcium channel" Journal of Biological Chemistry. 273. 34857-34867 (1998)
