1998 Fiscal Year Annual Research Report
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09670069
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| Research Institution | KYOTO UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
小林 茂夫 京都大学, 情報学研究科, 教授 (40124797)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
佐藤 雅彦 京都大学, 総合人間学部, 助手 (20283575)
竹安 邦夫 京都大学, 総合人間学部, 教授 (40135695)
石原 昭彦 京都大学, 総合人間学部, 助教授 (90184548)
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| Keywords | サーモスタット / mRNA / 発現クローニング / cDNAライブラリー / 後根神経節 / 視床下部 / 卵母細胞 / 冷受容ニューロン |
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| Research Abstract |
視床下部の温・冷受容ニューロンは,温度センサーと言われてきたが,研究代表者は、サーモスタットと特定した。次に、温受容ニューロンからパッチクランプし、加温で活性化するチャンネルがサーモスタットの基本要素と結論した。本研究では、この素子に関わる遺伝子(サーモスタット遺伝子)をアフリカツメガエル卵母細胞を用いた発現クローニング法で単離することを計画した。視床下部のmRNAを卵母細胞に注入し,3日後に,2電極を用いた電位固定法で加温に反応する電流の発現を記録した。そのなかで,加温が誘発する電流が記録された。しかし,水を注入したもの,あるいは,何も注入しない卵母細胞でも,加温感受性電流が流れた。その結果,この方法でのクローニングに成功しなかった。原因として,視床下部の加温感受性チャンネルの性質が十分に解析されていないこと,及びそのmBNAの発現が少ないと考えられることがあげられる。
その代わりに,末梢の後損神経節(DRG)にある温度受容器を対象に選んだ。培養したDRGからパッチクランプ記録した結果,冷に反応する電流の存在が分かった。その電流は,細胞外のCa,Mgイオンで,抑制された。また,その電流の逆転電位は,約0mVとなり,カチオンチャンネルだと分かった。そこで,DRGの冷受容性電流をコードする遺伝子のクローニングを現在めざしている。卵母細胞に固有の冷感受性電流はないことは,確かめている。
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