胎児発生過程におけるストレス蛋白質HSP105の役割に関する研究

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09670139
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Research Institution: Kyoto Pharmaceutical University
• Principal Investigator: 畑山 巧 京都薬科大学, 薬学部, 教授 (10094484)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 山岸 伸行 京都薬科大学, 薬学部, 助手 (60298685) ; 安田 邦彦 京都薬科大学, 薬学部, 助手 (50278446)
• Keywords: ストレス蛋白質 / HSP105 / HSP105遺伝子 / アポトーシス / 胎児発生

Research Abstract

1.マウスHSP105遺伝子のクローニングを行い、(1)HSP105遺伝子は21.8kヌクレオチド長のDNA上に18のエクソンと17のイントロンで構成されており、HSP105βで選択的スプライシングを受ける領域は第12番目のエクソンとして存在すること、(2)プライマー伸長法により転写開始点はATG開始コドンより166塩基上流のTであること、(3)プロモーター領域には-26〜-32にTATAbox、-45〜-62に熱ショック転写因子の結合する熱ショックエレメント、さらにCTFやSP1などの結合領域が存在し、ストレス誘導性を示すこと、また(4)サザンブロット解析よりHSP105遺伝子は1コピーであることなどを明らかにした。(投稿準備中)
今後、HSP105遺伝子のノックアウト・マウスを作製し、HSP105遺伝子の発生および分化における生理的機能また病理的役割を検討する予定である。
2.マウス胚奇形腫由来F9細胞の分化やアポトーシスにおけるHSP105の関与を検討するため、HSP105の発現をテトラサイクリンにより制御できるTet-offプラスミドを構築し、F9細胞にトランスフェクションしHSP105の誘導型発現を示すF9細胞クローンのスクリーニングをおこなっているが、現在未だ目的とする細胞株を分離できていない。現在、さらにTet-offプラスミドの構築など工夫してスクリーニングを行っている。
3.マウス胎児四肢の指間間充織のアポトーシス誘導におけるHSP105mRNA、HSP105蛋白質の部位特異的発現については、現在検討中である。

Research Products

• [Publications] Takumi Hatayama: "Characteristic expression of high molecular mass heat shock protein HSP105 during mouse embryo development." Cell Struct.Funct.22. 517-525 (1997)
• [Publications] Takumi Hatayama: "Reduced induction of HSP70 in PC12 cells during neuronal differentiation." J.Biochem.122. 904-910 (1997)
• [Publications] Takumi Hatayama: "Effects of hyperosmotic Nacl and glycerol Stress on stress response of human HeLa cells." Biol.Pharm.Bull.20. 605-612 (1997)
• [Publications] Hiroshi Oshima: "A possibility for new evaluating method of cytotoxicity by using heat shock protein assuy" J.Mater.Sci. : Mater.med.8. 143-147 (1997)