1998 Fiscal Year Annual Research Report
リゾフォスフォリパーゼによるコレラ毒素産生制御とToxRとの関連性
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09670280
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| Research Institution | Okayama Prefectural University |
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Principal Investigator |
山本 耕一郎 岡山県立大学, 保健福祉学部, 教授 (30158274)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
有田 美知子 岡山県立大学, 保健福祉学部, 助手 (10127178)
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| Keywords | フォスフォリパーゼ / コレラ菌 / 毒素 / 遺伝子 / 染色体 / lypA / ctxAB / toxR |
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| Research Abstract |
フィスフォリパーゼ遺伝子(lypA)の一部をクローン化したスーサイドベクターをコレラ菌に導入して作成し,lypA挿入変異株をいくつかの株をもちいて作成した.これらの挿入変異株ではコレラ毒素の産生量が著しく低下したことを確認した.とくに569B株においては1/500に低下していた.これにしたがってtoxRの発現も低下していていることがRT-PCR法によって確認できた.しかし,この方法では挿入されたスーサイドベクターの影響が遺伝子発現に作用している可能性が否定できない.したがって,クローン化したlypA遺伝子の上流と下流の領域を含み、構造遺伝子を含まない変異遺伝子を作成し,これをコレラ菌に導入して,二回の組換によって、lypAを完全に除いたlypAノックアウトコレラ菌を作成した。遺伝子が完全に欠失しているか否かはササンハイブリダイゼイションおよびPCR法によって遺伝子が存在しないことを確認した.コレラ毒素産生量はAKI培地をもちい菌を培養し,ラテックス凝集反応により定量した.その結果,分離された変異コレラ菌では、コレラ毒素の産生性が若干低下したものもあったが,通常の産生量の高い569B株のノックアウト株では十分な産生量は見られなかった.挿入変異で著しい低下をみせたのに対して,完全欠失株では低下が十分に見られなかったことは,挿入変異ではlypA近傍に強力にtoxRを制御する遺伝子が存在していることを示唆している.
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[Publications] Akeda,Y.,Nagayama,K.,Yamamoto,K.and Honda,T.: "Invasive phenotype of Vibrio parahaemolyticus." J.Infect.Dis.176. 822-824 (1997)
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[Publications] Hiratsu,K.,Yamamoto,K.and Makino,K.: "Molecular cloning and functional analysis of an rpoS homologue gene from Vibrio cholerae N86." Genes Genet.Syst.72. 115-118 (1997)
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[Publications] Makino,K.,et al.: "Complete nucleotide sequences of 98-kb and 3.3-kb plasmids of an enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 derived from Sakai outbreak." .DNA Res.5. 1-9 (1998)
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[Publications] Iida,T.,et al.: "Close proximity of the tdh,trh and ure genes on the chromosome of Vibrio parahaemolyticus." Micriobiology. 144. 2517-2523 (1998)
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[Publications] Yamaichi,Y.,Iida,T.,Park.K-S,Yamamoto,K.,Honda,T.: "Physical and genetic map of the genome of Vibrio parahaemolyticus: presence of two chromosomes in Vibrio species." Mol.Microbiol.31. 1513-1521 (1999)
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[Publications] Kojima,S.,Yamamoto,K.,Kawagishi,I.,Honma,M.:"The polar flagellar of Vibrio cholerae is driven by an Na^+ motive force." J.Bacteriol.181. 1927-1930 (1999)
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[Publications] Yamamoto,K.: "Heagglutinin/protease In Handbook of Proteolytic Enzymes" Academic Press,New York and London, 3 (1998)
