コレラ菌の定着因子

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09670291
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Research Institution: University of the Ryukyus
• Principal Investigator: 岩永 正明 琉球大学, 医学部, 教授 (00112384)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 本馬 恭子 琉球大学, 医学部, 助手 (90253955) ; 仲宗根 昇 琉球大学, 医学部, 助手 (80175497)
• Keywords: コレラ菌 / 定着因子 / LPS糖鎖 / 外膜蛋白

Research Abstract

1.コレラ菌の細胞質液中からゲル内沈降法によって抗V14線毛抗体と反応する物質を明らかに検出できるため、その物質の単離精製を試みてきたが、各種クロマトグラフィーによる分析で沈降活性を有する分画には多くの類似蛋白が混在し、さらにその分画をSDS-PAGE,western blott法によってV14抗原に存在を調べると抗原活性はほとんど消失していることが多かった。一方抗V14抗体がコレラ菌を凝集させないことからV14抗原は菌体表層に発現していないものと考えられ、V14線毛の研究は暗礁に乗り上げた。そこで現在、菌体の蛋白性接着因子として候補を外膜蛋白OmpUおよびフコース感受性凝集素に絞って検討を開始した。現在OmpUの精製と抗体作成を完了し、付着阻止実験を行っている。フコース感受性凝集素についてはコレラ菌86B3のchromosomal DNAにTn5をinsertionするためのmatingまで終了し、これから赤血球凝集能の消失株をスクリーニングする段階にかかっている。
2.菌体O抗原糖鎖がコレラ菌の腸上皮定着に対してどのような役割を示すかという課題については、抗加熱死菌血清から得たIgGのFab分画を用いて菌体を処理したところ菌株によっては有意に付着が阻止された。抗加熱死菌血清を用いたためそれが糖鎖阻害によるものか否かは断定出来ない。そのため抗LPSモノクローン抗体の作成を試みたがIgMのクローンのみでIgGのクローンが現れなかった。IgMからはFab分画にてこずり小休止の状態に入らざるを得なかった。従って現在はエルトール菌株82p7のLPSを抽出精製しそれを免疫原として抗体を作成し、Fab分画の精製を行っている。

Research Products

• [Publications] Yasuko Honma: "Conservation of cholera toxin gene in a strain of cholera toxin non-producing Vibrio cholerae O1" FEMS Microbiology Letters. 154・1. 111-116 (1997)
• [Publications] Masahiko Ehara: "Characterization of filamentous phages of Vibrio cholerae O139 and O1" FEMS Microbiology Letters. 154・2. 293-301 (1997)
• [Publications] Masaaki Iwanaga: "Molecular epidemiology of Vibrio cholerae O1 isolated from sporadic cholera cases in Okinawa,Japan." Microbiol.Immunol.41・11. 861-864 (1997)