1998 Fiscal Year Annual Research Report
膜融合を誘導するウイルス糖蛋白の構造と分子動態に関する研究
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09670311
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| Research Institution | Mie University |
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Principal Investigator |
鶴留 雅人 三重大学, 医学部, 助教授 (50159042)
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| Keywords | パラミクソウイルス / 細胞融合 / 分子間相互作用 / 点変異体 / キメラ蛋白 / 蛋白分解酵素 / 構造変化 / 受容体 |
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| Research Abstract |
1. SV5WR株のF蛋白およびその変異蛋白をBHKで発現させ、以下の知見を得た。
(1)WR株のF蛋白はHN蛋白との共発現で細胞融合を誘導したが、単独発現での融合能はなかった。(2)WR株とW3A株のF蛋白の推定アミノ酸配列の相違は22(Leu-Rro),443(Pro-Ser)および516(Ala-Val)の三箇所に認められた。WR株のF蛋白中のこれらのアミノ酸がW3A株のそれになるような点変異体を3種作製し、さらにこれらの変異体をもとにW3A株のF蛋白を発現させることができた。(4)W3A株のF蛋白は単独発現で細胞融合を誘導したが、これは22Pro(F2のN末端より3番目)に起因することが判明した。(5)細胞表面におけるWR株F蛋白の発現量はW3A株F蛋白の約2倍であった。(6)14Cグルコサミンで標識した細胞の溶解液を用いた免疫沈降法(還元状態)により、W3A株のFl(52kDa)の大部分が断片(23〜32kDa)化していることと、この現象が22Proに起因することが判明した。非還元状態ではこれらの断片は見られないので、この断片化は細胞由来の蛋白分解酵素がF1のCys-rich領域のループのどれかを切断した結果であると推論された。以上の成績から、(F2によって誘導される)Cys-rich領域近傍の構造変化と細胞融合能との関連が示唆された。
2. WR株の22LeuをPrOに改変した変異F蛋白(L22P)とイヌパラインフルエンザウイルスT1株のF蛋白とのキメラ蛋白を10種発現させて解析したところ、F1のHeptad Repeat 1領域に位置する132Gluも単独融合能に関与することが判明した。
3.W3A株のF蛋白やL22Pの単独融合能は発現させる細胞の種類に依存していた。この結果は細胞表面にF蛋白の受容体がある可能性を示唆するものと考えている。
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[Publications] Shigeomi Higuchi: "Induction of human osteoclast-like cells by treatment of blood monocytes with anti-fusion regulatory protein-1/CD98 monoclonal antibodies." Journal of Bone and Mineral Research. Vol.13. 44-49 (1998)
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[Publications] Masato Tsurudome: "Identification of regions on the fusion protein of human parainfluenza type 2 virus which are required for haemagglutinin-neuraminidase proteins to promote cell fusion." Journal of General Virology. Vol.79. 279-289 (1998)
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[Publications] Hideki Tsumura: "Mouse alloantigen Ly10 is identical to murine fusion regulatory protein-1(mFRP-1)/4F2/CD98:Aberrant expression of mFRP-1/Ly10 allotypes in cells derived from CDF1 mice." Cellular Immunology. Vol.184. 153-160 (1998)
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[Publications] Masato Tsurudome: "Primary structure of the light chain of FRP-1/CD98/4F2 predicts a protein with multiple transmembrane domains that is almost identical to the amino acid transporter E16." Journal of Immunology. Vol.162 (in the press). (1999)
