1999 Fiscal Year Annual Research Report
蛋白発現細胞株を使用したヌクレオキャプシド構成蛋白の解析
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09670312
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| Research Institution | Mie University |
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Principal Investigator |
西尾 真智子 三重大学, 医学部, 助手 (70156040)
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| Keywords | パラインフルエンザウイルス / L蛋白 / モノクローナル抗体 / P蛋白 / NP蛋白 |
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| Research Abstract |
1.今までにL蛋白に対する特異的なモノクローナル抗体は持っていなかった。L蛋白について解析するためにどうしてもL蛋白に対するモノクローナル抗体が必要である。そのためL蛋白のN末より374アミノ酸の領域の蛋白を大腸菌で発現させ、それを精製してマウスに免疫することによってL蛋白に対するモノクローナル抗体を作製した。
2.L蛋白に対するモノクローナル抗体を使って感染細胞内でのL蛋白の分布を調べたところ、細胞質がdiffuseに染まった。
3.L蛋白がP蛋白ともNP蛋白とも直接結合していることがそれぞれの蛋白を発現させ免液沈降法で調べたところ明らかになった。L蛋白とP蛋白の結合、L蛋白とNP蛋白の結合は同じ細胞内で発現させた場合だけでなく、別々の細胞で発現させ、mixした場合でも結合が見られた。更に結合に不可欠な領域を同定した。P蛋白はP蛋白の278〜353アミノ酸の領域でL蛋白と結合した。この領域はP蛋白同士が結合するために必要な領域とNP蛋白と結合するために必要な領域の間に当たる。NP蛋白はNP蛋白の403〜494アミノ酸の領域でL蛋白と結合していることが明らかになった。この領域はP蛋白のN末側の領域と結合することが明らかになった領域と重なる。
4.L蛋白と大腸菌で発現させたNP蛋白は結合するが、大腸菌で発現させたP蛋白は結合できなかった。この結果より、P蛋白のL蛋白との結合にはP蛋白のリン酸化が必要ではないかと思われる。
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[Publications] Masato Tsurudome: "Primary structure of the light chain of FRP-1/CD98/4F2 predicts a protein with multiple transmembrane domains that is almost identical to the amino acid transporter E16"Journal of Immunology. 162. 2426-2466 (1999)
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[Publications] Yasumitsu Higuchi: "Gene expression during osteoclast-like cell formation induced by antifusion regulatory protein-1/CD98/4F2 monoclonal antibodies(Mabs)"Bone. 25. 17-24 (1999)
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[Publications] Machiko Nishio: "Isolation of monoclonal antibodies directed against the V protein of human parainfluenza virus type 2 and localization of the V protein in virus-infected cells"Medical Microbilology and Immunology. 188. 79-82 (1999)
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[Publications] Masatoshi Tajima: "Suppression of FRP-1/CD98-mediated multinucleated giant cell and osteoclast formation by an anti-FRP-1/CD98 mAb,HBJ127,that inhibits c-src expression"Cellular Immunology. 193. 162-169 (1999)
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[Publications] Machiko Nishio: "Mapping of domains on the human parainfluenza virus type 2 nucleocapsid protein(NP) required for NP-phosphoprotein or NP-NP interaction"Journal of General Virology. 80. 2017-2022 (1999)
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[Publications] Morihiro Ito: "An amino acid in the heptad repeat 1 domain is important for the haemagglutinin-neuraminidase-independent fusing activity of simian virus 5 fusion protein"Journal of General Virology. 81. 719-727 (2000)
