1997 Fiscal Year Annual Research Report

胚性幹細胞分化系におけるジーントラップ法を用いた血液系細胞分化関連遺伝子の単離

Research Project

Project/Area Number	09670349
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Research Institution	Research Institute, Osaka Medical Center for Maternal and Child Health
Principal Investigator	吉田進昭大阪府立母子保健総合医療センター研究所, 免疫部門, 部長 (10250341)
Keywords	ジーントラップ / ES細胞 / 造血細胞 / 増殖因子 / 細胞分化 / クローニング
Research Abstract	造血系細胞分化にはサイトカイン、増殖因子やその受容体、接着分子や転写因子など多くの分子が深く関わっている。種々な系を用いてその分化過程が解析されているが、lineageコミットメントや幹細胞の自己増殖に関する因子等、不明な点も多い。本研究ではジーントラップ法を組み合わせ、in vitro、in vivoにおいて造血系細胞に分化することが知られているES細胞を用いて、造血系細胞への分化増殖に関連する遺伝子を単離、解析することを目的とする。本年度は構築されたジーントラップベクターを用いて基礎的な条件を検討した。ジーントラップベクターは、En-2イントロンの下流にスプライシング受容シグナル及びIRESシグナル断片を接続し、第2cis-tronであるマーカー遺伝子を効率よく発現させるという構築である。これにより、トラップ後その遺伝子上流のプロモーターの働きでマーカー遺伝子が転写、翻訳されることになり、トラップ後ポリAシグナルをその3'下流に持つ転写活性部位に入ったベクターのみがネオマイシン耐性を獲得することが予想される。実際にb-galをマーカーに、レチノイン酸に反応するいくつかのES細胞クローンを得、このベクターがワークすることが確認できた。しかし、ES細胞の分化はheterogeneousで分化した細胞の一部でマーカー遺伝子が発現したとしてもその細胞がどういう分化段階の細胞であるのかの同定は非常に困難である。実際にいくつかのin vitroでのES細胞文化系を用いて検討したがマーカー遺伝子の発現する陽性細胞の頻度はきわめて低かった。従ってES細胞をある特定のlineageに分化させる方向、あるいはFACSなどを用いて特定の分化段階の細胞をsortingする必要があると思われ、今後これらの点について検討が必要である。

Research Products
(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Tanaka,T.et al.: "Defective differentiation in mice lacking the C/EBPβ and/or C/EBPδ gene." EMBO J.16. 7432-7443 (1997)
[Publications] Iida,K.et al.: "Essential roles of the winged helix transcription factor MFH-1 in aortic arch patterning and skeletogenesis." Development. 124. 4627-4638 (1997)
[Publications] Murata,T.et al.: "Altered pain perception and inflammatory response in mice lacking prostacyclin receptor." Nature. 388. 678-682 (1997)
[Publications] Sugimoto,Y.et al.: "Failure of parturition in mice lacking the prostaglandin F receptor." Science. 277. 681-683 (1997)
[Publications] Tachibana,K.et al.: "CXCR4/fusin is not a species-specific barrier in murine cells for HIV-1 entry." J.Exp.Med.185. 1865-1870 (1997)
[Publications] Takeda,K.et al.: "Targeted disruption of the mouse Stat3 gene leads to early embryonic lethality." Proc.Natl.Acad.Sci.,USA. 94. 3801-3804 (1997)
[Publications] Yoshida,K.et al.: "Contemporary Immunology" ed.by Durum,S.K.et al. Humana press.NJ.USA, (1998)

1997 Fiscal Year Annual Research Report

胚性幹細胞分化系におけるジーントラップ法を用いた血液系細胞分化関連遺伝子の単離

Principal Investigator

吉田 進昭 大阪府立母子保健総合医療センター研究所, 免疫部門, 部長 (10250341)

Research Products

[Publications] Tanaka,T.et al.: "Defective differentiation in mice lacking the C/EBPβ and/or C/EBPδ gene." EMBO J.16. 7432-7443 (1997)

[Publications] Iida,K.et al.: "Essential roles of the winged helix transcription factor MFH-1 in aortic arch patterning and skeletogenesis." Development. 124. 4627-4638 (1997)

[Publications] Murata,T.et al.: "Altered pain perception and inflammatory response in mice lacking prostacyclin receptor." Nature. 388. 678-682 (1997)

[Publications] Sugimoto,Y.et al.: "Failure of parturition in mice lacking the prostaglandin F receptor." Science. 277. 681-683 (1997)

[Publications] Tachibana,K.et al.: "CXCR4/fusin is not a species-specific barrier in murine cells for HIV-1 entry." J.Exp.Med.185. 1865-1870 (1997)

[Publications] Takeda,K.et al.: "Targeted disruption of the mouse Stat3 gene leads to early embryonic lethality." Proc.Natl.Acad.Sci.,USA. 94. 3801-3804 (1997)

[Publications] Yoshida,K.et al.: "Contemporary Immunology" ed.by Durum,S.K.et al. Humana press.NJ.USA, (1998)

吉田進昭大阪府立母子保健総合医療センター研究所, 免疫部門, 部長 (10250341)