1997 Fiscal Year Annual Research Report

法医鑑定検査に適したHLA-DNAタイピングの研究

Research Project

Project/Area Number	09670434
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Research Institution	Shinshu University
Principal Investigator	太田正穂信州大学, 医学部・法医学, 講師 (50115333)
Keywords	PCR-RFLP / PCR-SSP / PCR-SSO / PCR-SSCP / DNAタイピング / HLAクラスI遺伝子 / HLA-クラスII遺伝子 / nested PCR
Research Abstract	HLA抗原のDNAレベルでの多型性は豊富で、クラスI抗原、クラスII抗原を発現する遺伝子は380以上にもなる。この中でもDRB1遺伝子数は、106種類確認されており、日本民族での遺伝学的指数(ヘテロ接合度、識別率、排除率)が高く法医学での利用価値があることを我々は報告してきた。PCR-RFLP法、PCR-SSO法、PCR-SSP法やPCR-SSCP法を用いたDNAタイピングは、いずれも良質で充分量のDNA試料が得られれば、精度の高い結果を示す。しかし、法医学で扱う試料は微量で陳用性が高い。今回はDRB1遺伝子タイピングについてnested PCRを用いた検査法について検討した。血清学的検査で調べることが可能な14種類の抗原(DR1,DR2,DR3,DR4,DR11,DR12,DR13.1,DR13.2,DR14.1,DR14.2,DR7,DR8,DR9,DR10)についてシークエンス特異的なプライマー(SSP)をつくり、PCRで増幅産物の有無から型判定をするシステムを作った。また型判定が微量試料でも可能になるよう各アリル特異的プライマーを挟むようにその上流と下流に共通プライマーを設定し、PCRを行い更に増幅産物を一部使い、SSP法でPCRを行うnested PCRの実用性について検討した。その結果10pgのDNAが確保できればタイピングが可能であることが示された。また、この方法でDR2,DR4,DR5,DR6,DR8のDRB1遺伝子多型性が高い抗原についてもRFLP法を用いてアリルタイピングが可能であることが証明された。SSP法を用いたDNAタイピングでは、0.998と0.84の識別率、排除率を示し、この方法の法医学での利用価値が高いことが示された。

Research Products

(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] Katsuyama,K.et al: "Genetic relatcenships amony Japanese Northern Han ; Hill,Usgur,Kazukh,Grek,Sawlidrtion and Italijun populetians haredon alleli & frequenygs dtfour VNTR on for STR." Human Heradity. (in press). (1988)
[Publications] Tomiya,G.et al.: "Twenty-six new polymorphic microsatellite markers around the HLA-B,-C,and-E loci in the Human MHC class I region." Tissue Antigens. (in press). (1988)
[Publications] Ando,H.et al.: "Allelic variants of the human MHC class I charn-reluted B gene (MICB)" Immunogenetics. 46. 499-508 (1977)
[Publications] Ota,M.et al.: "Validution of HLA-DR lowstyping in forensic speumans by combining PCR-SSP with PCR-RFLP" J.Forensic Sci.42. 929-934 (1997)
[Publications] Ota,M.et al.: "Trinucleotide repeut polymorphism withen exon5 of the MICA gene (MHC doss I chain-related gene A) allele freguenty data in thenine poplulation" Tissue Antigens. 49. 448-454 (1997)
[Publications] Mizuki,M.et al.: "Majors listocompulilility complex class II alleles in Kozak and Hum populations in the Silk Route of northwestern Chinu" Tissue Antigens. 50. 527-534 (1997)
[Publications] Inoko,H et al.: "Genetic diversity of HLA functional and medical imphication" EDK Medical and Scientific International Publishen, 10 (1977)
[Publications] 太田正穂: "新臨床免疫実験操作法" 科学評論社, 12 (1977)

1997 Fiscal Year Annual Research Report

法医鑑定検査に適したHLA-DNAタイピングの研究

Principal Investigator

太田 正穂 信州大学, 医学部・法医学, 講師 (50115333)

Research Products

[Publications] Katsuyama,K.et al: "Genetic relatcenships amony Japanese Northern Han ; Hill,Usgur,Kazukh,Grek,Sawlidrtion and Italijun populetians haredon alleli & frequenygs dtfour VNTR on for STR." Human Heradity. (in press). (1988)

[Publications] Tomiya,G.et al.: "Twenty-six new polymorphic microsatellite markers around the HLA-B,-C,and-E loci in the Human MHC class I region." Tissue Antigens. (in press). (1988)

[Publications] Ando,H.et al.: "Allelic variants of the human MHC class I charn-reluted B gene (MICB)" Immunogenetics. 46. 499-508 (1977)

[Publications] Ota,M.et al.: "Validution of HLA-DR lowstyping in forensic speumans by combining PCR-SSP with PCR-RFLP" J.Forensic Sci.42. 929-934 (1997)

[Publications] Ota,M.et al.: "Trinucleotide repeut polymorphism withen exon5 of the MICA gene (MHC doss I chain-related gene A) allele freguenty data in thenine poplulation" Tissue Antigens. 49. 448-454 (1997)

[Publications] Mizuki,M.et al.: "Majors listocompulilility complex class II alleles in Kozak and Hum populations in the Silk Route of northwestern Chinu" Tissue Antigens. 50. 527-534 (1997)

[Publications] Inoko,H et al.: "Genetic diversity of HLA functional and medical imphication" EDK Medical and Scientific International Publishen, 10 (1977)

[Publications] 太田正穂: "新臨床免疫実験操作法" 科学評論社, 12 (1977)

太田正穂信州大学, 医学部・法医学, 講師 (50115333)