HLAクラスII遺伝子のDNAタイピングと法医鑑定試料への応用

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09670452
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 柳田 純一 慶應義塾大学, 医学部・法医学, 教授 (70049790)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 富田 明代 慶應義塾大学, 医学部・法医学, 助手 (10286445) ; 原 正昭 埼玉医科大学, 法医学, 助手 (50129160) ; 村井 達哉 慶應義塾大学, 医学部・法医学, 助教授 (80129692) ; 篠塚 達雄 慶應義塾大学, 医学部・法医学, 講師 (70095610)
• Keywords: HLA-class II / DNAタイピング / 親子鑑定

Research Abstract

法医領域では、HLA-class IIのHLA-DQA1遺伝子のタイピング法としてHLA-DQa(PCR-SSO)法が多く用いられ既に普及している。
(1)SSP法によるHLA-DQA1遺伝子型判定を親子鑑定試料に適用し、HLA-DQa(SSO法)と比較し、その有用性について検討した。親子関係の否定されない8家系(26人)についてDQA1遺伝子型を検出した。親子鑑定におけるHLAクラスI検査後のリンパ球からphenol-chloroform法によりDNAを抽出した。DQA1遺伝子はDYNAL社のDQA1-SSPキットを用いて、16本のプライマーでDNAをPCR増幅した後、アガロースゲル電気泳動により12アリルの同定をした。同時にAmpliType社のHLA-DQaキットを用いてHLA-DQa型を検査した。HLA-DQa型とSSP法によるDQA1型の結果はすべて一致した。
(2)RCR-SSO法によるHLA-DRB DNAタイピングの親子鑑定例への応用について検討した。
4家系(No.1-No.4)12名について、SSO-DRBキット(Biotest社)を用いてSSO-DRBタイピングし、親子鑑定4例(否定例2例、肯定例2例)を検討した結果、DRB1型の検査結果は、4家系共に従来の血液型検査成績と矛盾しなかった。DRB1遺伝子型判定は、親子鑑定へ充分利用できるものと思われた。また、この結果は、PCR-SSP法の結果とすべて一致した。

Research Products

• [Publications] 篠塚達雄、柳田純一ら: "PCR-SSP法を用いたHLA-DQA1遺伝子の解析と親子鑑定への応用" DNA多型. 5. 250-253 (1997)
• [Publications] 篠塚達雄、村井達哉ら: "台湾人家系の親子鑑定例" 法医学の実際と研究. 39. 45-49 (1996)
• [Publications] 原正昭、篠塚達雄ら: "乳幼児突然死症候群(SIDS)症例のHLA-DNAタイピング" 医学と生物学. 134. 117-121 (1997)
• [Publications] 富田明代、柳田純一ら: "Ampdirect^<TM>を用いた全血の直接PCR法とHLAクラスII遺伝子DNAタイピング" 法医学の実際と研究. 40. 13-17 (1997)