レチノイドレセプター遺伝子導入による膵癌遺伝子治療についての基礎的検討

1998 Fiscal Year Final Research Report Summary

• Project/Area Number: 09670513
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 一般
• Research Field: Gastroenterology
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 川邊 隆夫 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (40195136)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 大橋 誠 東京大学, 医学部・附属病院, 医員 ; 金井 文彦 東京大学, 医学部・附属病院, 医員 ; 白鳥 康史 東京大学, 医学部・附属病院, 講師 (70196624)
• Project Period (FY): 1997 – 1998
• Keywords: 膵癌 / レチノイドレセプター / 遺伝子導入 / テロメラーゼ活性

Research Abstract

テロメラーゼ活性を有する6種の膵癌細胞株AsPc-1、BxPC-3、KP-IN、MIAPaCa―2、PANC-1、Su.86.86、およびコントロールとして白血病細胞株HL-60を用い、培養上清中に全トランスレチノイン酸(ATRA)、あるいは9-シスレチノイン酸(9-clsRA)を1μMの濃度で添加し、6日間培養した後、1×CHAPS溶解液で蛋白抽出液を作成した。各抽出液の蛋白量を定量後、蛋白濃度が等しくなるように調製してassayに用いた。テロメラーゼ活性はKimらのTRAPassayに基づいて評価した。白血病細胞株HL-60の培養上清中にATRA、9-cisRAを添加するとテロメラーゼ活性は抑制されたが、6種の膵癌細胞株では、テロメラーゼ活性の抑制は認められなかった。そこで、アデノウイルスベクターを用いた膵癌細胞株へのRAR(Retinoic Acid Recepter)およびRXR(RetinoidX Recepter)遺伝子の導入、およびそれに基づく遺伝子治療を試みた。まず、RARおよびRXR遺伝子を組み込んだアデノウイルスベクターの作製し、膵癌細胞株(AsPC-1、BxPC3,KP-1N、MIAPaCa-2、PANC1、Su.86)トランスフェクトした。これら細胞株のrecepter発現について、免疫組織染色、ウエスタンブロット法により検討したが、現在のところそれ程強い過剰発現はみられていない。また、このトランスフェクト細胞株において、ATRAおよび9-sisRAのテロメアーゼにおよぼす影響についても検討したが、テロメラーゼ活性を抑制する作用は認められなかった。これは十分なレチノイドレセプターの過剰発現が得られていないためである可能性が高く、現在さらに、効率良くRARおよびRXRを発現させるためにトランスフェクトの条件を検討中である。

Research Products

• [Publications] Kanai F、Ohashi M: "Invivo gene tharapy for alpha-fetoprotein-producing hepatocelluar carcinoma by adenovirus-mediated transfer of cytosine deaminase gene"Cancer Res. 57. 461-465 (1997)
• [Publications] Ohashi M、Kawabe T: "In vivo adenovirus-mediated produg gene therapy for carcinoembryonic antigen-producing pancreatic cancer"Jpn.J Cancer Res. 89. 457-462 (1998)
• [Publications] Shiratori Y、Karai F: "Gene-therapy for hepaticmicrometastasis of murine colon carcinoma"J Hepatology. 28. 886-895 (1998)
• [Publications] Ohashi M、Kawabe T: "Adenovirus mediated p53 tumor suppreor gene therapy for human gastric cancer cells in vitro and in vivo"Gut. 44. 366-371 (1999)
• [Publications] Kawabe T、Shiratori Y: "High proportion of mutant K-ras gene in pancreatic juice of patients with pancreatic cystic lesions"Gut. 45. 737-740 (1999)
• [Publications] Kawabe T、Shiratori Y: "Washout of small stones in the bile duct by saline infusion using aside-holed balloon catheter in patients undergoing endoscopic papillary balloon dilation"Gastrointest Endosc. 46. 101-104 (1999)