1999 Fiscal Year Annual Research Report
フコース転移酵素アンチセンスオリゴヌクレオタイドを用いた肝細胞癌治療
Project/Area Number |
09670520
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Research Institution | NIIGATA UNIVERSITY |
Principal Investigator |
青柳 豊 新潟大学, 医学部, 助教授 (00142266)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
鈴木 健司 新潟大学, 医学部, 助手 (00303123)
大越 章吾 新潟大学, 医学部・附属病院, 助手 (70231199)
小谷 昌司 新潟大学, 理学部, 教授 (60018702)
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Keywords | フコース転移酵素 / アンチセンス / 肝細胞癌 / 治療 |
Research Abstract |
今年度はClontech社(USA)のTet-off systemを用い,pTet-offベクターをHeLa細胞にトランスフェクトし,ネオマイシン耐性により持続安定発現株を選択,樹立した.次に,pTREベクターにNishikawa,A.ら(BBRC198, 318-327,1994)によって報告されているGnt-VのmRNA配列と,Yanagidani,S.ら(J.Biochem.121,626-632,1997)によって報告されているα1-6FTのmRNAの配列に基づきプライマーを設定し,RT-PCRによってGnt-V(nt.54-495)とα1-6FT(nt.-20-693)のcDNAをHepG2より調整し,クローニングした.これらのクローニングされたベクターと,選択マーカであるハイグロマイシン耐性遺伝子を持つpTK-Hygとをカチオニックリポソームを用いて,テトラサイクリンリプレッサー蛋白を持続発現しているHeLa細胞にコトランスフェクトし,ハイグロマイシンで選択した.約10^5のHeLa細胞を用いてリポフェクションを施行すると,50前後のハイグロマイシン耐性のクローンを選択する事が出来た.そして,やや不安定ながら,ドキシサイクリン存在下にセンス,あるいはアンチセンスRNAを発現する株を樹立し,現在その生物学的特性を評価中である.
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Research Products
(8 results)
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[Publications] 馬場 勝也: "The amino acid sequence of a lamprey (Entosphenus japonicus) liver fatty acid-binding protein identified its close relationship to cardiac fatty acid-binding proteins of Mammalia."Comparative Biochemistry and Physiology,. 123. 223-228 (1999)
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[Publications] 五十川 修: "Reduction of telomeric repeat as a possible predictor for development of hepatocellular carcinoma; convenient evaluation by slot-blot analysis."Hepatology,. 30. 408-412 (1999)
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[Publications] 見田 有作: "Plasma fucosyltransferase activity in patients with hepatocellular carcinoma, with special reference to correlation with fucosylated species of alpha-fetoprotein."J Hepatology, 2000. (in press). (2000)
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[Publications] 斉藤 崇: "Elevation of TFF1 (pS2) gene expression during healing of gastric ulcer at 'non-ulcerated' sites in the stomach: Semi-quantification using single tube method of polymerase chain reaction."J Gastroenterol Hepatol, 2000. (in press). (2000)
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[Publications] 川合 弘一: "Asymptomatic primary sclerosing cholangitis with marked hepatic fibrosis."Digestive Diseases & Science 2000. (in press). (2000)
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[Publications] 滝沢 英昭: "A case with diffuse narrowing of the main pancreatic duct successfully treated by steroid therapy."Digestive Endoscopy, 2000. (in press). (2000)
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[Publications] 青柳 豊: "消火器疾患"医歯薬出版. 562 (1999)
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[Publications] 青柳 豊: "肝臓病"中外医学社. 318 (1997)