B型肝炎ウィルスX遺伝子の肝癌発生機序に関する研究

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09670539
• Research Institution: Mie University
• Principal Investigator: 高瀬 幸次郎 三重大学, 医学部, 助教授 (00163204)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 清水 敦哉 三重大学, 医学部, 助手 (10283524) ; 伊藤 正明 三重大学, 医学部・附属病院, 講師 (00223181)
• Keywords: HBx / two hybrid / LBP / アポトーシス

Research Abstract

(1) HBVキャリアーからの肝癌発症患者血清より、PCR法を用いてX遺伝子を増幅し、その塩基配列を決定した(5例)。コントロールとして、HBV無症候性キャリアーのX遺伝子も平行して解析したが、肝癌発症患者と比較して特異的塩基配列の差は認めなかった。
(2) 肝癌発症患者より得られたX遺伝子をpAS2-1ベクターに組み込み、HBx標的蛋白質の遺伝子をヒト肝細胞cDNAライブラリーより、イーストを用いた2ハイブリド法を用いてクローニングした。得られたcDNAの1つ、LBP(laminin binding protein)に関心をもち現在HBxとの関連を他の方法で確認中である。
(3) HBxに対する特異抗体が必要なため、HBx特異的ペプチドを合成し、ウサギに免疫した。その血清より抗HBx特異抗体をアフィニティー精製し、リコンビナントHBx蛋白を用いウエスタンブロッティングによりHBx特異抗体であることを確認した。
(4) 肝細胞由来培養細胞にHBxをトランスフェクションし、種々の刺激によるアポトーシス誘導に対するHBxの影響を検討中である。