1998 Fiscal Year Annual Research Report
肝癌遺伝子治療の研究:標的細胞への選択的遺伝子導入と導入遺伝子の効率的発現
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09670557
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
中尾 一彦 長崎大学, 保健管理センター, 講師 (00264218)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中田 恵輔 長崎大学, 医学部, 助教授 (40217740)
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| Keywords | 遺伝子治療 / 肝細胞癌 / α-Fetoprotein(AFP) / 組換えレトロウィルス |
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| Research Abstract |
α-Fetoprotein(AFP)遺伝子は肝細胞の癌化に伴い再発現することが知られている。本研究では、このAFP遺伝子の5'上流転写調節領域を用い、肝癌細胞に対する遺伝子治療の基礎実験を行った。これまでのin vitroでの検討から、AFP遺伝子プロモーター0.3Kbの制御下において自殺遺伝子:単純ヘルペスウィルスチミジンキナーゼ(HSV-TK)遺伝子を挿入した組換えレトロウィルス(LNAF0.3TK)をヒト肝癌培養細胞に導入しガンシクロビル(GCV)投与すると、AFP産生量に応じて腫瘍細胞の殺傷効果が得られることが明らかとなっている。そこで(LNAF0.3TK)を導入したAFP高産生肝癌培養細胞(HuH-7)をヌードマウス皮下に移植し、腫瘍形成後、腹腔内にガンシクロビル(GCV)投与したところ、腫瘍は退縮し、in vivoに於いても良好な抗腫瘍効果が得らことが明らかとなった。さらに、AFP低産生肝癌培養細胞に対する抗腫瘍効果を高めるために、AFP遺伝子プロモーター0.3KbにAFP遺伝子エンハンサーdomain B領域を結合させた組換えレトロウイルス(LNAF0.3E+TK)を作成した。このウイルスをAFP低産生肝癌培養細胞(PLC/PRF5,huH-1)に導入しガンシクロビル(GCV)投与すると、in vitro、in vivoに於いて、LNAF0.3TK導入時に点変異が生じていることが報告されている。CAT assayの結果、この変異型AFP遺伝子プロモーターは野生型よりも強い転写活性を持つことが解った。そこで変異型AFP遺伝子プロモーター0.3kbを含む組換えレトロウイルス(LNAF0.3MTK)を作成し同様の検討を行ったところ、(LNAF0.3TK)に比べより強い抗腫瘍効果、バイスタンダー効果を示した。以上の結果から、種々のAFP遺伝子転写調節領域を用いることで、AFP産生量の少ない肝細胞癌の遺伝子治療も可能となることが明らかとなった。
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[Publications] Toshihito Ueki: "Retrovirus-mediated gene therapy for human hepatocellular carcinoma transplanted in athymic mice" International Journal of Molecular Medicine. 1・4. 671-675 (1998)
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[Publications] Fumihiro Mawatari: "Retrovirus-mediated gene therapy for hepatocellular cacrinoma:Selective and enhanced suicide gene expression regulated by human α-fetoprotein enhancer directly linked to its promoter" Cancer Gene therapy. 5・5. 301-306 (1998)
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[Publications] Hiroki Ishikawa: "Utilization of variant-type of human α-fetoprotein promoter in gene therapy targeting for hepatocellular carcinoma" Gene therapy. (in press). (1999)
