ヒト由来肝細胞の3次元培養法による肝特異蛋白産生機構の解析と大量蛋白生産法の開発-ラジアルフロー型バイオリアクター(RAD)による-

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09670578
• Research Institution: JIKEI UNIVERSITY SCHOOL OF MEDICINE
• Principal Investigator: 蓮村 哲 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (30189518)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 新谷 稔 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (20198419) ; 高木 一郎 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (10197056)
• Keywords: 血漿蛋白 / アルブミン / アルファフェトプロテイン / トロンボポイエチン / ラジアルフロー型バイオリアクター / ヒト肝由来細胞株 / 三次元培養

Research Abstract

ラジアルフロー型バイオリアクターによる培養細胞の3次元構築は、SEM TEMで確認し、球形の細胞の配列と、相互の細胞の緩やかな接着(接着装置の存在を認める)、細胞小器官の極性の存在を認めた。FLC4細胞の3次元培養では単位細胞あたりのアルブミン産生量は単層培養の6.9倍に増加し、AFPは400分の1に減少した。またFLC7細胞では3次元培養により、AFP産生が優位であったものがアルブミン産生優位となり、より正常肝細胞に類似の機能を発現すると考えられた。
以上より、これら肝細胞の機能発現には、ホルモン、ビタミン、その他の生理活性物質だけでなく、細胞組織の3次元的構築が大きく関与することが明らかとなった。また肝由来蛋白である、thorombopoietinも本研究に用いた肝由来細胞株において産生され、その産生量はラジアルフロー型バイオリアクターを用いた際には、細胞数の増加、アルブミン産生量の増加に一致して漸増し、ほぼヒト正常肝の1日産生量に近い量を400mlバイオリアクターで産生可能であった。ラジアルフロー型バイオリアクターによる肝特異蛋白の高産生能が示された。

Research Products

• [Publications] 蓮村哲: "ヒト由来肝癌細胞を用いたラジアルフロー型バイオリアクターによるアルブミン大量産生" 人工血液. 5. 33-37 (1997)
• [Publications] 蓮村哲: "人工肝補助装置を用いた肝解毒機能の検討" 肝臓. 39. 507-508 (1998)
• [Publications] Satoshi Hasumura: "Massive Culfore of Human Liver Cancer Cells in a Newly Developed Radial flow Bioreacfor Syatem" In Vitro Cell Dev Biol. 34. 109-115 (1998)
• [Publications] Satoshi Hasumura: "Effects of nerve growth factor and glucocercicood on culfs human pheacrsoma cytoma cells" Med Electron Microsc. 31. 24-30 (1998)
• [Publications] 蓮村哲: "肝臓病の最前線1997" 中外医学社, 409 (1997)