相補性ペプチドによる重症筋無力症の新しいエピトープ特異性免疫抑制療法の開発

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09670657
• Research Institution: Tottori University
• Principal Investigator: 荒賀 茂 鳥取大学, 医学部, 助教授 (40193065)
• Keywords: コンプリメンタリーペプチド / 重症筋無力症 / pGEM vector / Pin Point Xa-1 vector / T細胞アネルギー

Research Abstract

重症筋無力症患者(MG)のblocking抗体のエピトープに対するコンプリメンタリーペプチドをラットに感作することによって得た抗体(RhE,IgG2a,kappa)が、anti-idiotype抗体として患者血清でのiditype抗体を認識を示すことをすでに報告した。この抗体の臨床応用を目的として、そのDNA解析とその結果に基づくrecombinant蛋白の作成を本年度の行った.RT-PCR法により、RhEのheavy chainおよびlight chainのvariable region部の増幅を行い、pGEM vectorに組み込み、DNAの解析を行った。得られた塩基配列より、variable region部のDNAをPinPoint Xa-1 vectorに組み込み、recombinant蛋白の作成を行った。
DNA解析より、RhEのheavy chain variable region部のCDR3部が、idiotype抗体の認識に深く関わっていることが確認された。
さらに抗体産生に関係するT細胞によるヘルパー機能が,そのエピトープに対するコンプリメンタリーペプチドの感作により生じた抗体が,抗T細胞レセプターのβ領域を認識し,その増殖を抑制し,抗体産生をブロックする.この機序に関して,このブロックが,IL-2の投与により,部分的に回復することより,T細胞アネルギーであることを証明した.
本研究の臨床応用を進めるために,現在既に開発した2つのタイプの抗コンプリメンタリーペプチド抗体であるTCM240とRhE抗体を使い,reverse phase IEF法を応用し,より簡便なMGにおける自己抗体の検出方法を開発中である.

Research Products

• [Publications] 荒賀茂也: "A complementary peptide vacine that induces Tcellaneray and prevents EAN in Leurs rats"J.Jmmunology. 163. 476-482 (1999)
• [Publications] 荒賀茂也: "重症筋無力症疾患者のbinding抗体を認識するTCM240抗体のrecombinant蛋白の作製"Neuroimmunology. 7. 162-163 (1999)
• [Publications] 荒賀茂也: "重症筋無力症疾患者のblocking抗体を認識するコンプリメンタリーペプチド抗体"Neuroimmunology. 7. 233-238 (1999)
• [Publications] 荒賀茂也: "EANを抑制するコンプリメンタリーペプチド抗体によるT細胞anergyの導入"Neuroimmunology. 8. 94-95 (2000)
• [Publications] 荒賀茂也: "Apeptide uaccine that prevents EAMlr by specifically blocking Tcell help"FASEB Journal. 14. 185-196 (2000)