Triplet repeat disease遺伝子の不安定性のメカニズムについて

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09670666
• Research Institution: Jichi Medical School
• Principal Investigator: 滝山 嘉久 自治医科大学, 医学部, 助手 (00245052)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 西澤 正豊 自治医科大学, 医学部, 助教授 (80198457)
• Keywords: CAGリピート / DRPLA / 不安定性 / レーザーキャプチャーマイクロダイセクション / germ line cell

Research Abstract

我々はこれまでCAGリピート病の原因遺伝子内のリピートの不安定性機構を解明することを目的として研究を行ってきた.今年度は、まず、Machado-Joseph病家系の臨床遺伝学的観察を行い、母親由来でも認められる表現促進現象は、リピート以外のmaternal factorによることを報告した.次に、レーザーキャプチャーマイクロダイセクション(LCM)法を用いて、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症(DRPLA)におけるヒト生殖細胞の分化過程のどの段階でリピート数が不安定となるのかを、剖検組織を用いて検証した.方法として、まずDRPLA剖検例のformalin固定後の精巣と卵巣をparaffin包埋し、厚さ10mmの連続切片を作成した.次いで、脱paraffin処理後HE染色を行った切片から、LCM100(ARCTURUS)を用いたLCM法により、直径30ミクロンの大きさで精子・卵子の形成過程にある種々の細胞群を切り取り、nested PCR法によりCAGリピート部分を増幅した.PCR産物は、ABIPRISM 310 genetic analyzerにて電気泳動し、CAGリピート数を解析した.その結果、(1)LCM法を用いてformalin固定後の組織切片から切り取った細胞群においても、DRPLA遺伝子内のCAGリピート数を同定することができた.(2)現在のシステムでは関心領域を直径30ミクロン以下に絞り込むことは困難であるために、特に精巣の精子形成過程にある細胞群をそれぞれ単離することはできなかった.最近米国で発売されはじめたLCM200(ARCTURUS)では、直径7.5ミクロンの領域から細胞を切り取ることが可能である.我々の研究室では近々LCM200が導入されるので、今後DRPLAをはじめとするCAGリピート病の生殖細胞の分化過程にある細胞群について、単一細胞レベルでリピート数の解析を行い、精子・卵子の形成過程のどの段階でリピート数が不安定となるのかを明らかにし、その分子機構を解明したいと考えている.

Research Products

• [Publications] Takiyama Y: "Maternal anticipation in machado-Joseph disease(MJD):some maternal factors independent of the number of CAG repcat units may play a role in genetic anticipation in a Japanese MJD family." J Neurol Sci. 155. 141-145 (1998)
• [Publications] Takayama Y: "A Japanese family with spinocerebellar ataxia type b which includes 3 individuals homozygous for an expanded CAG repeat in the SCA6/CACNLI A 4 gene." J.Neurol Sci. 158. 141-147 (1998)
• [Publications] Onodera O: "Progressive atrophy of cerebllum and brainstem as a function of age and the size of the expanded CAG repeats in the HJD 1 gene in Machado Joseph disease." Ann Neurol. 43. 288-276 (1998)
• [Publications] Kawakami T: "Chronic bromvalerylurea intoxication:case report a dystonic posture and cerebellar ataxia due to nonsteroidal anti-inplammatory drug abuse." Int Med. 37. 788-791 (1998)
• [Publications] Takano H: "Close associations between the prevalence rates dominantly inherited spinocerebellar ataxias with CAG repeat exmnsions and the freguencies of large natural CAG dleles in Japanese and caucasion papalations." Am J Hum Genet. 63. 1060-1066 (1998)
• [Publications] Takiyama Y: "Single sperm analysis of the CAG repcats in the gene for dentatorabral pollidoluysian atrophy(DRPLA):the instability of the CAG repcats in the DRPLA gene is prominent among the CAG repeat diseases." Hum Mol Genet. (in press).
• [Publications] Takiyama Y: "An unusual case of facial diplegia" Nuscle & Nerve. (in press).
• [Publications] 滝山嘉久: "遺伝性脊髄小脳変性症の遺伝子と臨床像,Machado-Joseph病/SCA-3" 神経内科. 49. 221-228 (1998)
• [Publications] 羽生修治: "深部脳静脈血栓症の若年女性例.-経時的画像および剖検所見-" 臨床神経. 38. 816-821 (1998)
• [Publications] 田口朋広: "著名な錐体路徴候を呈したHuntington病の一症例" 神経内科. 48. 385-387 (1998)
• [Publications] 田口朋広: "Negro徴候は実在するか?" 神経内科. 48. 491-492 (1998)
• [Publications] 滑川道人: "Episodic ataxia with nystagmus(EA-2)と思われる孤発例" 臨床神経. 38. 446-449 (1998)
• [Publications] 山岸由幸: "大脳皮質,線条体に抗ubiquitin抗体陽性の封入体を証明し得たハンチントン病の一例" 総合臨床. 47. 2628-2630 (1998)
• [Publications] 滝山嘉久: "神経症候群:晩発性皮質小脳萎縮症" 日本臨床社, 印刷中