心肥大関連チロシンキナーゼ遺伝子のクローニングをその病態解析

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09670729
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Research Institution: Nagasaki University
• Principal Investigator: 瀬戸 信二 長崎大学, 医学部附属病院, 講師 (00136657)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 山下 俊一 長崎大学, 医学部, 教授 (30200679) ; 伊東 正博 長崎大学, 医学部, 助教授 (30184691) ; 矢野 捷介 長崎大学, 医学部, 教授 (50039864) ; 松山 俊文 長崎大学, 医学部, 教授 (30165922) ; 大津留 晶 長崎大学, 医学部, 助手 (00233198)
• Keywords: 心肥大 / チロシンキナーゼ型受容体 / HGF / c-Met / VEGF / Flk-1,Flt-1 / Tie2 / Tek

Research Abstract

正常、及び肥大心筋に発現しているチロシンキナーゼ型受容体のプロフィールを明らかにし、肥大心に関連した遺伝子を特定するため、DOCA-Salt高血圧ならびに2腎-1クリップ高血圧ラット肥大心とコントロール正常心よりmRNAを抽出後、チロシンキナーゼ遺伝子のコンセンサス配列を利用したRT-PCR法による部分遺伝子クローニングを行った。その結果、サブトラクションPCR法により得られたクローンのうち80クローンについて塩基配列を決定した。データベース検索により受容体型チロシンキナーゼ群には、PDGF受容体-α、PDGF受容体-β、FGF受容体-3、Insulin受容体、IGF-1受容体、Tie2/Tek、Flk-1、Axl/Ufo、RYK、CSF-1受容体が、非受容体型チロシンキナーゼ群には、c-Abl、c-ros、JAK-1、JAK-2、JAK-3が、さらに未知の遺伝子由来のクローンが2個見いだされた。受容体型チロシンキナーゼのうち心筋では、Tie2/Tek、RYK、CSF/1受容体が最も多く発現していた。既知の遺伝子のうち、免疫化学染色によりFlk-1 Flt-1及びそれらのリガンドVEGF、c-MetとそのリガンドHGF、またTie2/Tekの心臓での発現を確認した。以上より、心筋におけるチロシンキナーゼ型受容体には、既知の心肥大増殖因子以外に血管内皮増殖因子ファミリーが関与している可能性が示唆された。現在、免疫化学染色により確認されたFlk-1、Flt-1、c-Met、Tie2/Tekについて、また、これらの発現の特異性を免疫組織化学やin situ hybridizationにて局在を明らかにし病理学的に解析するとともに、心臓の初代培養系においても細胞生物学的検討も加える予定である。さらに、その結果から心肥大関連因子が得られた場合は、トランスジェニックマウスを作成し遺伝子治療の可能性の検討を行う。