心肥大関連チロシンキナーゼ遺伝子のクローニングとその病態解析

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09670729
• Research Institution: Nagasaki University
• Principal Investigator: 瀬戸 信二 長崎大学, 医学部・附属病院, 講師 (00136657)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 山下 俊一 長崎大学, 医学部, 教授 (30200679) ; 伊東 正博 長崎大学, 医学部, 助教授 (30184691) ; 芦澤 直人 長崎大学, 医学部・附属病院, 助手 (10301368) ; 矢野 捷介 長崎大学, 医学部, 教授 (50039864) ; 大津留 晶 長崎大学, 医学部, 助手 (00233198)
• Keywords: 心肥大 / キロシンキナーゼ型受容体 / HGF / c-Met / VEGF / Flk-1,Flt-1 / Tie2 / Tek

Research Abstract

正常、及び肥大心筋に発現しているチロシンキナーゼ型受容体のプロフィールを明らかにし、肥大心に関連した遺伝子を特定するため、2腎-1クリップ高血圧ならびにDOCA-Salt高血圧ラット肥大心とコントロール正常心よりmRNAを抽出後、チロシンキナーゼ遺伝子のコンセンサス配列を利用したRT-PCR法による部分遺伝子クローニングを行った。その結果、サブトラクションPCR法により得られたクローンのうち81クローンについて塩基配列を決定し、10個の受容体型チロシンキナーゼ遺伝子、5個の非受容体型チロシンキナーゼ遺伝子、さらに未知の遺伝子由来のクローンが2個見いだされた。最も多く発現している受容体型チロシンキナーゼは、Tie2/Tekであり、以下Ryk、IGF-1受容体、PDGF-β受容体、PDGF-α受容体、FGF-3受容体、KDR/Flk-1、Axl/Ufo、Insulin受容体、CSF-1の順に発現が見られた。一方、非受容体型チロシンキナーゼ群には、Arg/c-Abl、c-Ros1、JAK-1JAK-2、JAK-3が同定された。また、semi-competetiveRT-PCR法によりHGFとその受容体であるc-Met、VEGFとその受容体であるKDR-Flk-1、Tie2-Tekの発現が確認されたが、いずれも肥大心とコントロール正常心の間でmRNAレベルに差を認めなかった。しかし、免疫化学染色法で、2腎1クリップ高血圧ならびにDOCA-salt高血圧性肥大心の心室でコントロールと比べ、c-MetおよびTie-2のimmunostaining増大が認められた。そこでWestern blot analysisを用いて蛋白レベルでの発現を検討したところ、2腎1クリップ高血圧においてDOCA-salt高血圧やコントロールラットと比較し、HGF、c-Met、Tie-2の増加が見出された。以上より、心筋におけるチロシンキナーゼ型受容体には、既知の心肥大増殖因子以外に血管内皮増殖因子ファミリーが関与している可能性が示唆された。