心筋細胞の終末分化過程における細胞周期抑制遺伝子・癌抑制遺伝子の役割

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09670749
• Research Institution: KEIO UNIVERSITY
• Principal Investigator: 福田 恵一 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (20199227)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小玉 博明 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (70225457) ; 石川 士郎 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (90193276)
• Keywords: Cardiomyocyte / AT-1 cell / mitogenesity / cell cycle / AngiotensinII

Research Abstract

【目的】AogIIは平滑筋細胞などでは細胞分裂促進的に働くのに対し,ラット新生児培養心筋細胞に対しては分裂促進的ではなく,肥大促進的に働くとされている。近年細胞分裂能を強く保持したAT-1心筋細胞(ANPromoterにSV40のlarge Tを挿入して作成した形質転換細胞)が開発された。本研究の目的はAogIIがAT-1心筋細胞に対し分裂促進的に働くか,肥大促進的に働くかを明らかにすることである。【方法】AT-1細胞を初代培養3日目に48時間の無血清培養により細胞周期をG0にした。(1)AngII(10^<-9>-10^<-7>M)の単独刺激およびaFGF,PDGF存在下の刺激により[^3H]-Thymidine uptakeを計測した。(2)AngII刺激前,6,12,18,24,30,36,42時間後にcyclinA,B,C,D1,D2,D3,E,cdc2,cdk2のNorthernBlotおよびcdc2,cdk2のHiston H1 kinase assayを行った。(3)Losartan,PD123319(1型,2型受容体拮抗薬)存在下に刺激を行い,BrdUのuptakeを抗ミオシン抗体との二重免疫蛍光染色にて観察した。【結果】(1)AngII刺激により容量依存的にThymidine uptakeは上昇した。aFGF,PDGF存在下では上昇はより顕著になった。(2)刺激後6時間よりcyclinC,D1,D2,D3,cdk2の上昇を認め,18時間後よりcdc2,cyclin Aの上昇を認めた。刺激後6時間よりcdc2,cdk2によるHiston H1のリン酸化を認めた。(3)AngII刺激に伴ってAT-1心筋細胞のBrdUの取り込みを確認した。この反応はLosartanにより抑制された。【総括】AT-1心筋細胞においてはAngIIは1型受容体を介し細胞分裂促進的に働いた。このことはAngII刺激は心筋細胞の状態(細胞周期への入りやすさ)によって細胞肥大・分裂の双方に働くことを示すものと考えられた。

Research Products

• [Publications] Makino S,Fukuda K,: "Cardiomyocytes can be generated from marrow stromal cellsin vitro." The Journal of Clinical Investigation. 103. 697-705 (1999)
• [Publications] Pan J,Fukuda K,: "Mechanical stretch activates the JAK/STAT pathway in rat cardiomyocytes" Circulation Research. in press (1999)
• [Publications] Murata M,Fukuda K,: "Leukemia inhibitory factor enhances L-type Ca2+ current and [Ca2+](i) transint in rhodent cardiomyocytes." Jouenal of Molecular and Cellular Cardiology. 31. 237-245 (1999)
• [Publications] Fukuda,K,Izumo S: "Angiotensin II potentiates DNA synthesis in AT-1 transfromed cardiomyocytes." Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 30. 2069-2080 (1998)