PDGF-A鎖に対するアンチセンスDNA法による血管増殖性疾患の遺伝子治療の開発

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09670763
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Research Institution: Nihon University
• Principal Investigator: 福田 昇 日本大学, 医学部, 助手 (40267050)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 渡辺 吉康 日本大学, 医学部, 助手 (10267049)
• Keywords: 血小板由来成長因子 / アンチセンス / 高血圧 / 遺伝子治療 / DNA

Research Abstract

今回の研究目的はPDGF-A鎖mRNAに対するアンチセンスDNAを高血圧症の血管障害及びPTCA後の再狭窄の遺伝子治療として確立する事であり、平成9年度はアンチセンスDNAの自然発症高血圧ラット(SHR)の心血管臓器増殖に対する作用をin vitro、in vivoで検討し、アンチセンスDNAの効率の良いデリバリーシステムを検討した。
PDGF-A鎖mRNAの開始コドン(ATG)領域に相補的なアンチセンスオリゴはSHR由来VSMCの基礎増殖を有意に抑制したが、正常血圧Wistar-Kyotoラット(WKY)由来VSMCの増殖には影響せず、PDGF-AA蛋白の発現を抑制しPDGF-A鎖mRNAの発現は抑制しなかった。in vivoでSHRに投与すると大動脈の^3H-チミジンのDNAへの取り込み、PDGF-AA蛋白産生を著明に抑制した。アンチセンスオリゴをpolynuculeokinase-4を用い^<32>PでラベルしSHRの腹腔内投与したところ、大動脈での取り込みは他の臓器の2倍で臓器への取り込みは0.001%であった。さらに脳卒中易発症高血圧ラット(SHR-SP)では腎臓のDNAを有意に抑制した。
PDGF-A鎖mRNAはalternative splicingを受けエクソン6のあるPDGF-A長鎖とないPDGF-A短鎖が存在するので、エクソン6に対しアンチセンスオリゴを作成し、SHR及びWKY由来YSMCのDNA生合成に対する作用を検討した。エクソン6に対するアンチセンスオリゴはSHR由来VSMCのみ基礎DNA生合成を抑制し、SHR由来VSMCの過剰増殖にPDGF-A長鎖が関与している事が確認された。

Research Products

• [Publications] 福田昇(Noboru Fukuda): "Antisense oligodeoxymucleotiode complementary to PDGF A-chain mRNA inhibits the arterial proliferation in spontaneonsly bypertensive rats without alteration of blood pressure" Journal of Hypertension. 15. 1123-1136 (1997)
• [Publications] 福田昇(Noboru Fukuda): "Role of long-form PDGF A-chain in the growth of vascular smooth nmscle cells from spontaneonsly bypertemsive rats." American Journal of Hypertension. 10. 1117-1124 (1997)
• [Publications] 福田昇(Noboru Fukuda): "Abnormal regulation of TGF-β reuptors on vascular smooth muscle cells from spontaneously bypertensive rats by angiotensin II." Hypertension. (発表予定/印刷中). (1998)
• [Publications] 福田昇(Noboru Fukuda): "Molecular mechanisms of the exaggerated growth of vascular smooth muscle cells in bypertension." Journal of Atherosclerosis and Thrombosis. (発表予定/印刷中). (1998)