プロピオン酸血症の病態解明:バキュロウイルス蛋白発現系を用いた変異蛋白質の解析

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09670781
• Research Institution: Tohoku University
• Principal Investigator: 大浦 敏博 東北大学, 医学部, 助教授 (10176828)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 呉 繁夫 東北大学, 医学部, 助手 (10205221)
• Keywords: プロピオン酸血症 / プロピオニルCoAカルボキシラーゼ

Research Abstract

昨年度に引き続きプロピオン酸血症患者の遺伝子解析を行った。プロピオン酸血症の原因酵素であるプロピオニルCoAカルポキシラーゼ(以下PCCと略)はα、β2つのサブユニットで構成されている。我々は6例のα鎖欠損患者の遺伝子解析を行なったところ、cDNAの解析では5つのミスセンス変異(R52W,Q272R,R374Q,P398L,W534L)と、2ヵ所の欠失(111bp del.,nt.1355-1465;103bp del.,nt.1466-1568)及び3人の患者に共通した84bpの挿入を検出した。ゲノムDNAの解析でlllbpの欠失に関してはその下流のイントロンの5'スプライス部位のG^<+1>→A変異が認められ、これによるエクソンスキッピングと考えられた。84bpの挿入は正常でもわずかに生じるaberrant splicingであり原因変異ではないと考えられた。
次に、約2.0kbのαPCCcDNAをトランスファーベクターpBac3にサブクローン後、このプラスミドDNA1μgと直鎖状バキュロウイルスベクター0.25μgを混合しHigh Five細胞に加えて27ﾟCで3日間培養し、αPCCを持つ組換えウイルスを作成した。この組換え体ウイルスを昆虫細胞に感染させ、5日間培養後その上清を回収しαPCC蛋白質の発現をウエスタンブロット法でチェックしたがαPCC蛋白質は検出されなかった。今後ベクター、昆虫細胞の培養条件、トランスフェクションの条件等をさらに検討する必要がある。

Research Products

• [Publications] Magdalena Ugarte et al: "An overview of mutations in the PCCA andPCCB genes causing propionic acidemia." Human Mutation. in press. (1999)
• [Publications] Ohura T et al: "A 84-bp insertion found in a propionic acidemia patient is not a disease causing mutation but a product of cryptic mRNA." Journal of Inherited Metabolic Disease. in press. (1999)
• [Publications] 大浦敏博: "プロピオン酸血症" 別冊日本臨床 領域別症候群シリーズ、先天代謝異常症候群. No.18 (上巻). 276-279 (1998)