アレルギー発症に関与する血小板内在性化学伝達物質の産生機構の解明

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09670796
• Research Institution: Shinshu University
• Principal Investigator: 小池 健一 信州大学, 医学部小児科, 助教授 (40143979)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 沢井 信邦 信州大学, 医学部小児科, 助手 (60281044) ; 上松 一永 信州大学, 医学部付属病院, 助手 (60262721)
• Keywords: megakaryocyte / chemokine / IL-8 / IL-1 / thrombopoietin / IL-recenpor

Research Abstract

近年、血小板産生刺激因子としてトロンボポエチン(TPO)がクローニングされた。このTPO刺激下で抗CD34抗体結合免疫磁気ビーズ法により得られた臍帯血CD34陽性細胞を無血清培養すると、選択的に巨核球が産生された。次いで、培養上清中のサイトカインをELISA法で測定した。さらにRT-PCR法とフローサトメトリー法で巨核球中のIL-8産生を検討した。培養10日目の巨核球の培養上清中には数pg/mLのIL-1β、IL-6とともに、1,000pg/mL以上のIL-8が検出された。巨核球培養上清による好中球の遊走能を検討したところ、FMLP刺激時の半分の遊走活性がみられ、抗IL-8抗体によりこの活性は消失した。IL-8産生はTPO、IL-1αの単独刺激に比べ、両者の添加により相乗的に増加した。RT-PCR法およびフローサトメトリー法により巨核球自身がIL-8を産生することが明らかとなった。以上より、TPOは巨核球の増殖分化を刺激するだけでなく、IL-1存在下で巨核球によるIL-8産生を促進することが示唆された。
さらに、培養巨核球を用いてIL-8以外の血小板内在性ケモカイン産生能を検討した。TPOにIL-1を添加すると、TPO単独に比べ、巨核球数、endomitosisや表面マーカーの発現には影響は認められなかったが、IL-8とGRO-αの産生が増加した。しかし、RANTES、血小板第4因子やβ-トロンボグロブリンの分泌能には差違はみられなかった。培養巨核球はIL-1受容体を発現しており、IL-1受容体に対する中和抗体の添加により、TPO+IL-1によるIL-8、GRO-α産生刺激能は消失した。以上より、巨核球はTPOとIL-1の共存下で、IL-1受容体を介してケモカイン産生能が高まることが明らかとなった。

Research Products

• [Publications] Sawai, N, Koike K, et al: "Neutrophilic cell production by combination of SCF and TPO from CD34_+ cord blood cells in long-term serum-deprived liquid culture." BLOOD. 93. 509-518 (1999)
• [Publications] Kakeuchi K, Koike K, et al: "Chemokine production by human megakarytes derived from CD34-positive cord blood cells." CYTOKINE, in press.
• [Publications] Sawai N, Koike K, et al: "Thrombopoietin enhances the production of myeloid cells, but not megakaryocyts in juvenile chronic myelogenous leukemia." BLOOD. 91. 4065-4073 (1998)
• [Publications] Ma F, Koike et al: "Establishment of a GM-CSF-dependent megakaryoblastic cell line with the potential to differentiate into an eosinophilic lineage in response to retinoic acids." Br J Haematol. 100. 427-435 (1998)
• [Publications] Higuchi T, koike K, et al: "Megakaryocytes derived from CD34-positive cord blood cells produce interleukin-8." Br J Haematol. 99. 509-516 (1997)
• [Publications] Higuchi T, Koike K ,et al: "Proliferative and differentiative potential of thrombopoietin-responsive precursors : Expression of megakaryocytic and erythroid lineages." Exp Hematol. 25. 463-470 (1997)