1997 Fiscal Year Annual Research Report
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09670842
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Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Tokyo Women's Medical University |
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Principal Investigator |
中野 和俊 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (00172362)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
石井 のぞみ 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (90287342)
臼井 紀久 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (70246643)
池谷 紀代子 東京女子医科大学, 医学部, 講師 (70151313)
斎藤 加代子 東京女子医科大学, 医学部, 助教授 (90138834)
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| Keywords | ミトコンドリア / 電子伝達系酵素 / microplate reader / carnitine / 血小板carnitine / Reye-like症候群 / cytochrome c / ミトコンドリア脳筋症 |
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| Research Abstract |
1.microplate reader(MPR)を用いた酵素活性測定法は少量の検体量、大量の検体処理等の利点がありミトコンドリア機能検査への応用が期待される。(1)筋組織から分離精製したミトコンドリアからMPRを用いて電子伝達系複合体II-IIIに続きI、IV測定法を開発した。現在、正常対象の酵素活性を測定し再現性を検討している。(2)血液より分離した血小板からMPRを用い、複合体II-III、IVの測定法を開発した。現在、正常対象の酵素活性を測定し再現性を検討している。複合体I測定法は検討中である。又、ミトコンドリア脳筋症での複合体各酵素活性を測定中である。(3)MPRを用いて血清free,total carnitine(Car)および血小板free Car測定法を開発した。Car欠損症の症例にL-Carを急性期、回復期に点滴静注投与し、急性期には血小板free Carの上昇が認められずcarnitine transporterの障害が示唆された。Reye-like症候群の急性期にも血小板free Carは低下しておりcarnitine transporterの障害が示唆された。今後、ミトコンドリア障害の症例のCar測定法を行う予定である。
2.患者に投与しているcytochrome cの至適投与量を検討するため血清中の微量cytochrome c含量測定法の開発を目指した。cytochrome F,CoQ-cytochrome c reductaseを用いたcycling法を現在開発中である。
ミトコンドリア病患者、健常者から血小板、白血球を分離精製し液体窒素保存し約200検体を蓄積している。更に蓄積予定である。また、細胞培養におけるミトコンドリア活性化の検討を目指し、ミトコンドリア病患者の繊維芽細胞培養を蓄積している。今後、ミトコンドリア活性化の検討のため、培養細胞におけるミトコンドリア機能評価をNMR specrometer、ミトコンドリア電子伝達系酵素、およびCar測定など用いて確立する予定である。
PCRを用いてミトコンドリアDNA(mtDNA)のpoint mutation、deletationを検討を目指し、本年度は、np3243,8344,8356,8993変異の同定を修得した。今後SSCP、血小板のmtDNAを検討する予定である。
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[Publications] 中野和俊, 大澤真木子: "代謝:Reye-like syndrome" 診断と治療(症候群事典1000). 98増(印刷中). (1998)
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[Publications] 中野 和俊ら: "横紋筋融解症,急性腎不全を呈した筋型carnitine欠損症におけるL-carnitine静注療法の試み" 日本小児臨床薬理学会雑誌. 10. 69-72 (1997)
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[Publications] 中野 和俊ら: "血小板carnitine測定を用いたReye-like症候群における急性期carnitine動態の検討" 東京女子医科大学総合研究所紀要1996年度報告書. 17. 159-160 (1997)
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[Publications] 臼井紀久, 中野和俊ら: "ミトコンドリア脳筋症患者におけるcytochrome c Vitamin B_1,B_2 静注および経口投与による臨床症状の変化" 日本小児臨床薬理学会雑誌. 9. 73-75 (1996)
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[Publications] Shults CS, Nakano K,et al.: "Carbidopa/levodopa and selegiline do not affect platelet mitochondrila function in early parkinsonism" Neurology. 45. 344-348 (1995)
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[Publications] Haas RH, Nakano K, et al.: "Low platelet mitochodrial complex I and complex II/III activity in early untreated Parkinson's disease." Ann Neurol. 37. 714-722 (1995)
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[Publications] Haas RH, Nakano K, et al.: "Oxidative metabolism in Rett syndrome : 2.Biochemical molecular studies." Neuropediatrics. 26. 95-99 (1995)
