1998 Fiscal Year Final Research Report Summary

ビタミンDによる遺伝子発現抑制の分子機構-新しいビタミンD抑制反応DNA配列とそれに結合する転写因子群

Research Project

Project/Area Number	09671033
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Allocation Type	Single-year Grants
Section	一般
Research Field	内分泌・代謝学
Research Institution	The University of Tokyo
Principal Investigator	岡崎具樹東京大学, 医学部・附属病院分院, 助教授 (60203973)
Project Period (FY)	1997 – 1998
Keywords	ビタミンD / ビタミンD受容体(VDR) / 副甲状腺ホルモン関連ペプチド(PTH-P) / 遺伝子転写調節 / 核内ホルモン受容体 / Kn抗原
Research Abstract	1)ヒトPTHrP遺伝子上の負のビタミンD反応性DNA配列(nVDRE_<hPTHrP>)を標識し、成人Tリンパ球MT2細胞核蛋白との間でゲルシフトアッセイ(EMSA)を行った。一方、(positive)VDREとしてオステオポンチン遺伝子のVDRE(VDREmop)を合成し同様のEMSAを行った。競合実験から、この2種のDNAは、異なる組み合わせの核蛋白と結合することがわかった。 2)このEMSAの系にVDR及びRXRの抗体を加えた結果、VDREmopにはMT2細胞核蛋白においてVDR-RXR複合体が結合するが、nVDRE_<hPTHrP>には、VDRのみが、VDREmopとは異なる結合様式で、RXRではない他の核蛋白と結合した。 3)Ku抗原に対する抗体を用いたEMSAで、このnVDRE_<hPTHrP>に対して、VDRと協調的に結合する蛋白の一つにKu抗原が含まれることがわかった。 4)nVDRE_<hPTHrP>、VDREmopをそれぞれ含むレポーター遺伝子をMT2細胞に導入したところ、1,25ビタミンD_3のnVDRE_<hPTHrP>を媒介とする転写抑制現象がこのDNA配列特異的に認められた。この抑制はKu抗原のアンチセンス発現ベクターの共導入によって解消した。 5)ビタミンDはDNA-MT2核蛋白複合体の結合を抑制した。この結合抑制は、酸フォスファターゼ処理で解除された。このことからビタミンDによるVDRの燐酸化がこの現象に関与する可能性が示唆された。以上から、ビタミンDは、a)nVDREと結合するVDRの立体構造を変化させ、b)さらにおそらくVDRとは別個の部位のnVDREに結合しているKu抗原がリクルートしてくるDNA-PKによってこの構造を変えたVDRを燐酸化させ、c)nVDREとVDRの結合を減弱させる結果、nVDREを介する転写抑制を惹起している可能性が示された。

Research Products
(5 results)

All Other

All Publications (5 results)

[Publications] Chung.N et al: "The intervention between Ku antigen and REFI protein mediates negative gene regulation by extra cellular calcium"J.Biol.Chem.. 271. 8593-8598 (1996)
[Publications] Hiraketa.M et al.: "Tyrosine kinase dependent expression of tGFβ induced by stretch in mesangial cells."Kidney Int.. 51. 1028-1036 (1997)
[Publications] Okazaki.T et al.: "Hyperosmolanty induced gene stimulation is mediated by the negative calcium responsive element."J.Biol.Chem.. 272. 32274-32279 (1997)
[Publications] Nishishite.T et al.: "A negative vitamin D responsive DNA element in the human pTHrP gene binds to vitamin D receptor along with Ku antigen ‥‥"J.Biol.Chem.. 273. 10901-10907 (1998)
[Publications] Okezaki T.: "Gene regulation by extracellular calcium、Vitamin D and osmolarity."Endocrine J.. 46. 1-9 (1999)

1998 Fiscal Year Final Research Report Summary

ビタミンDによる遺伝子発現抑制の分子機構-新しいビタミンD抑制反応DNA配列とそれに結合する転写因子群

Principal Investigator

岡崎 具樹 東京大学, 医学部・附属病院分院, 助教授 (60203973)

Research Products

[Publications] Chung.N et al: "The intervention between Ku antigen and REFI protein mediates negative gene regulation by extra cellular calcium"J.Biol.Chem.. 271. 8593-8598 (1996)

[Publications] Hiraketa.M et al.: "Tyrosine kinase dependent expression of tGFβ induced by stretch in mesangial cells."Kidney Int.. 51. 1028-1036 (1997)

[Publications] Okazaki.T et al.: "Hyperosmolanty induced gene stimulation is mediated by the negative calcium responsive element."J.Biol.Chem.. 272. 32274-32279 (1997)

[Publications] Nishishite.T et al.: "A negative vitamin D responsive DNA element in the human pTHrP gene binds to vitamin D receptor along with Ku antigen ‥‥"J.Biol.Chem.. 273. 10901-10907 (1998)

[Publications] Okezaki T.: "Gene regulation by extracellular calcium、Vitamin D and osmolarity."Endocrine J.. 46. 1-9 (1999)

岡崎具樹東京大学, 医学部・附属病院分院, 助教授 (60203973)