1998 Fiscal Year Annual Research Report
血小板膜糖蛋白GPIbを介するoutside-inのシグナル伝達の解析
| Project/Area Number |
09671143
|
|---|
| Research Institution | THE TOKYO METROPOLITAN INSTITUT OF MEDICAL SCIENCE |
|---|
Principal Investigator |
山本 正雅 財団法人 東京都臨床医学総合研究所, 循環器病研究部門, 研究員 (50150884)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田上 憲次郎 東京都臨床医学総合研究所, 循環器病, 研究員 (30014137)
松野 一彦 北海道大学, 医療技術短期大学部, 教授 (70102332)
加瀬 良一 東京都臨床医学総合研究所, 臨床遺伝, 研究員 (20150203)
|
|---|
| Keywords | GPIbα / 14-3-3ζ / ATP放出 / リストセチ凝集 / GPIb / IX / V複合体 / BSS Tokyo II. / シグナル伝達 / Bernard-Soulier syndrome |
|---|
| Research Abstract |
血小板膜糖蛋白GPlb/IX/V複合体はvon Wi11ebrand因子やトロンビン結合部位があり、血小板の粘着に重要な役割を果たしている。GPlbαにはQ545よりC一末端側の細胞内ドメインにactin-binding protein(ABP)や14-3-3ζと結合する部位があり、vWFがGPlbαに結合後、outside-1nのシグナル伝達との関係が注目される。Bernard-Soulier syndrome(BSS)Tokyo 11と命名した患者はホモ接合体のQ545Xの変異をもち、GPlbαのこのc一末端が欠損している。血小板におけるGPlbα依存性のシグナル伝達の機序を検討するために、患者の血小板を調べた。患者血小板のリストセチン凝集は弱く、1.2mg/mlでは解離性を示した。患者血小板での放出反応であったが、患者血小板はリストセチン凝集が対照に比べ弱く、同凝集の高さを得る対照の血小板凝集では明らかな放出反応が認められたが、患者の血小板ではATPの放出反応が全く認められなかった。
これらの結果から、BSS Tokyo llはGPlbαを介するoutside-inのシグナルの伝達が阻害されていることが明らかとなった。BSS Tokyo 11の変異をもつGPlbαを動物細胞に発現するべく、Q545XのGPlbα遺伝子と正常遺伝子を調製し、発現ベクターであるp-TargeTに導入した。患者のVNTRの数を考慮し患者の2回繰り返しに合わせた。GPlbのC一末端で結合し、シグナリング分子として考えられている14-3-3ζはcDNAをPCRで増幅後、P-TargeTに導入した。GPlbαの細胞表面への発現にはGPlbβとGPIXのco-expressionが必要であることがLopezらにより明らかにされている。そこで、彼らが作成したGPIbβ/GIXをCHOに安定に発現した細胞を恵与して頂いた。現在、変異体のGPlbαを発現実験中である。14-3-3ζはubiquitousに発現しており、CHOに発現したGPlb/GP1X複合体は細胞に本来存在する14-3-3ζと結合して発現してくると考えられるので、14一3-3ζの遺伝子の導入は必ずしも必要でなかったかもしれない。本実験で発現ベクターに組み込んだ患者のGPlbαの遺伝子は、今後さらにGPlbα依存性のシグナル伝達に応用できると考えられる。
|
Research Products
(5 results)
-
[Publications] 山本正雅: "血小板膜受容体研究の進歩" MEDICO. 29. 4-7 (1998)
-
[Publications] 山本正雅: "Montreal platelet syndrome(モントリオール血小板症候群)" 症候群辞典 診断と治療. 86 Suppl.267 (1998)
-
[Publications] 山本正雅, 山崎博男: "血小板の分子生物学" 分子アレルギー学. 217-224 (1998)
-
[Publications] Tadokoro S et al: "A Gin →Pro susbstitution in the αIIb.subunit is a responsible for a moderate αIIbβ3 deficiency in Glanzmman Thrombasthenia." Blood. 92. 2750-2758 (1998)
-
[Publications] Ichinohe T et al.: "Collagen-stimulated activation of Syk but not c-Src is severely compromised in human platelets lacing membrane glycoprotein VI." J Biol Chem. 272. 63-69 (1997)
