1997 Fiscal Year Annual Research Report
糸球体スリット膜を中心とした上皮細胞間接着装置構成分子の解明
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09671156
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Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
矢尾板 永信 新潟大学, 医学部, 助手 (00157950)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
木原 達 新潟大学, 医学部, 教授 (80018324)
山本 格 新潟大学, 医学部, 助教授 (30092737)
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| Keywords | 腎臓 / 糸球体 / 上皮細胞 / カドヘリン / プロトカドヘリン / FAT |
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| Research Abstract |
ラット腎臓より糸球体を単離、RNA分離後cDNAを合成し、カドヘリンのEC-3からEC-4までの部位を増幅するdegenerate primerを用いてRT-PCRを行った。増幅された130bpのシークエンスを行った結果、プロトカドヘリンに属する多くのクローンが得られたことが分かった。これらをプローブとして用い、ribonuclease protection assayにて、糸球体、腎皮質、腎髄質におけるmRNAの量を比較し、糸球体に特異的に多く存在するクローンを選別した。その結果、8種類のクローンが同定された。この中で、メッセージ量が多く、human FAT proteinにhomologyの高いクローンについてさらに検索を進めた。このcDNAの5'および3'方向に各々約500bpほど解析を進めた結果、アミノ酸レベルでhuman FAT proteinと80〜90%の一致を示し、rat FAT proteinに相当するものであることが分かった。そこですでに報告されているhuman FAT proteinのアミノ酸配列をもとに、そのC端末に相当するオリゴペプチドを作り、家兎に免疫、得られた抗血清に対しaffinity purificationを行った。この抗体でヒト腎組織を免疫組織学的に検討したところ、成人の腎糸球体には存在せず、発達途上の未分化な糸球体上皮細胞間に染色が観察された。また、古典的カドヘリン、およびデスモゾームのマーカーのデスモプラキンに対する抗体を用いた二重蛍光抗体法にて、FAT proteinとの位置関係をみた。その結果、デスモプラキンとも、カドヘリンとも重ならない染色がしばしば存在し、デスモゾームおよびadherens junctionに対応しない細胞間接着を形成している可能性が示された。今後は、FAT proteinの未分化糸球体上皮細胞におけるより詳細な分布の検討、病的状態における変化等を追求していきたい。また、他のプロトカドヘリンのクローンについても同様の検索を行っていきたい。
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[Publications] 矢尾板永信: "糸球体培養における上皮細胞" 腎と透析. 43. 187-192 (1997)
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[Publications] 森田俊: "半月体の構成成分としての上皮細胞" 腎と透析. 43. 243-246 (1997)
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[Publications] 矢尾板永信: "Transient expression of desmoplakins in murine glomeruligenesis" Cell-Cell Interaction in Kidney NIHON-IGAKUKAN. 29-40 (1997)
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[Publications] 木原達: "Podocyte detachment and epithelial cell reaction in focal segmenta glomerulosclerosis with cellular variants" Kidney International. 52. S-171-S-176 (1997)
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[Publications] 矢尾板永信: "糸球体上皮細胞培養" Annual Review 腎臓1998. 25-30 (1998)
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[Publications] 後藤眞: "Involvement of R codherin in the early stage of glomerylogenesis" J.Am.Soc.Nephrol. (印刷中). (1998)
