2000 Fiscal Year Annual Research Report
コルチゾル産生副腎皮質腺腫(クッシング症候群)の発症機序に関する研究
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09671223
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
舟橋 啓臣 名古屋大学, 医学部, 講師 (50135357)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
今井 常夫 名古屋大学, 医学部, 講師 (80252245)
村田 善春 名古屋大学, 環境医学研究所, 教授 (80174308)
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| Keywords | クッシング症候群 / コルチゾル産生副腎皮質腺腫 / ACTH受容体遺伝子 / SF-1(Ad4-BP) / グルタチオン-S-トランスフェラーゼ) |
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| Research Abstract |
1.ACTH-R遺伝子の5′-調節領域の機能解析:ヒトACTH受容体遺伝子の調節領域に各種の欠失、突然変異を導入し、ルシフェラーゼレポーター遺伝子の上流に挿入した。これらを種々の細胞にトランスフェクトして調節領域の機能を解析した。その結果、副腎特異的発現を賦与する転写因子SF-1の結合部位を2ヶ所同定すると共に、ACTH依存性のACTH受容体遺伝子の発現促進が転写因子AP-1を介していることも明らかにした。
2.コルチゾル産生副腎皮質腺腫(CPA)に特異的に発現する遺伝子グルタチオン-S-トランスフェラーゼA1(GST-A1)遺伝子の機能:CPAとそれに隣接する正常副腎からRNAを抽出、mRNAを精製後、逆転写酵素を用いてcDNAを作成した。このcDNAを二重鎖DNAにした後、制限酵素Dpn IIにより消化し、約300bpのフラグメントとし、アダプターを付け、CPA、正常副腎のそれぞれをPCRにより増幅しアンプリコンを作成した。この両者のアンプリコンを用いてサブトラクションPCRを行い、CPAに特異的に発現しているcDNA群をクローニングした。その結果、GST-A1遺伝子が同定された。ノーザン解析によりGST A1 mRNAの発現は、CPAに強く認められたが正常副腎では殆ど発現が認められなかった。抗体を用いたWestern blotおよびimmunohistochemistryによってもGSTの発現が腺腫組織に確認された。更に、ヒト由来の副腎皮質細胞株にGSTの特異的阻害剤であるエタクリン酸を加えると細胞増殖が著明に抑制され、GST A1がCPAの増殖に重要な役割を果たしていることが示唆された。
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[Publications] Imai T,Sarkar D,Shibata A,Funahashi H, et al.: "Overexpression of glutathione S-transferase A1 (GSTA1) in benign adrenocortical adenomas from patients with Cushing's syndrome"Journal Clnical Endocrinology and Metabolism. (印刷中).
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[Publications] Sarkar D,Imai T,Kambe F, et al.Funahashi H,Seo H.: "Expression of adrenocorticotropin receptor gene in adrenocortical adenomas from patients with Cushing's syndrome : Possible contribution for the autonomous production of cortisol"Annals of Surgery. (印刷中).
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[Publications] Imai T,Kikumori T,Funahashi H,Nakao A: "Surgical management of Cushing's syndrome. Biomed Pharmacother."Biomedical Pharmacotherapy. 54 Suppl 1. 140-145 (2000)
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[Publications] Sarkar D,Kambe F,Hayashi Y,Ohmori S,Funahashi H,Seo H: "Involvement of AP-1 and steroidogenic factor (SF)-1 in the cAMP-dependent induction of human adrenocorticotropic hormone receptor (ACTHR) promoter."Endocrine Journal. 47・1. 63-75 (2000)
