1997 Fiscal Year Annual Research Report
乳癌に発現するCDK variantのクローニングと機能解析
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09671263
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Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | St. Marianna University School of Medicine |
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Principal Investigator |
福田 護 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 助教授 (50081724)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
緒方 晴樹 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 助手 (60267581)
太田 智彦 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 助手 (60233136)
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| Keywords | Δcdc2 / Δcdk2 / 乳癌 / RT-PCR |
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| Research Abstract |
すでに我々はcdc2のdeletion typeのvariantであるΔcdc2をクローニングし、日本DNAデータバンクに登録している。平成9年度は、Δcdc2の蛋白レベルでの機能解析を目的として、1.Δcdc2-cDNAのPCR法による作製、2.リコンビナントΔcdc2蛋白の精製を行った。さらに、3.他のcdk familyに於けるvariantの検出を目的として、cdk2のvariantであるΔcdk2をクローニングした。Δcdc2同様、現在日本DNAデータバンクに登録申請中である。
1.Δcdc2-cDNAのPCR法による作製
原発性乳癌新鮮凍結標本よりmRNAを精製。リコンビナント用に両末端配列を調整した。
2.リコンビナントΔcdc2蛋白の精製
CMV-promoterを用いて、両末端配列を調整したΔcdc2-cDNAをSaos2 osteosarcoma cellへ遺伝子移入した。詳細はCancer Researchに掲載予定である。
3.Δcdk2の分離、クローニング
原発性乳癌新鮮凍結標本よりmRNAを精製。RT-PCRによりcDNAを作製、cdk2遺伝子を増幅させた。ゲル電気泳動にて増幅させたcdk2遺伝子を分離し、そのシークエンスを解析した。
解析の結果、102bpのdeletionをきたしたvariantであった。Δcdk2は、cyclin binding site、ATP binding siteが保たれているが、thr160近傍のT-loopが欠如していた。
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[Publications] 福田護: "川崎市におけるマンモグラフィ精度管理システム構築の検討" 厚生省がん研究助成金平成8年度報告. (1997)
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[Publications] 福田護: "川崎市乳癌検診参加施設のマンモグラフィの精度の検討" 日本乳癌検診学会誌. 6・2. 167-174 (1997)
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[Publications] 今村恵子: "マンモグラフィの精度管理のためのファントム画像データベース" 日本乳癌検診学会誌. 6・2. 271-279 (1997)
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[Publications] 大内憲明: "マンモグラフィ導入による乳癌検診の問題点と対策" 日本乳癌検診学会誌. 6・2. 137-143 (1997)
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[Publications] T.Ohta: "Analysis of cdc2 and Cyclin D1 Expression in Breast Cancer by immunoblotting" J.Jpn Breast Cancer Soc.Vol.4,No.1. 17-24 (1997)
