末期肝不全・先天異常等による肝実質細胞機能不全に対する細胞療法の開発

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09671270
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Research Institution: National Research Institute for Child Health and Development
• Principal Investigator: 絵野沢 伸 国立小児病院, 小児医療研究センター・実験外科生体工学部, 室長 (40232962)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 奥山 虎之 同センター, 遺伝研究室, 室長 ; 李 小康 同センター, 同部, 科学技術庁特別研究員 ; 鈴木 盛一 国立小児病, 院小児医療研究センター・実験外科生体工学部, 部長 (00111386)
• Keywords: 肝不全 / 細胞療法 / 遺伝子導入 / 肝細胞増殖 / 肝細胞分化 / 肝上皮幹細胞 / 羊膜細胞 / 免疫抑制

Research Abstract

末期肝不全あるいは肝細胞の先天性代謝異常症の新規な治療法としての細胞移植による肝組織再構築を目的として、1)肝上皮幹細胞の探索、2)肝細胞分化誘導因子の探求、3)細胞への遺伝子導入による機能付与、4)移植細胞生着のための免疫抑制、の面から研究を遂行している。
1)肝上皮幹細胞の探索
肝の構成細胞の過半を占める実質細胞は均一な細胞集団ではなく酵素分布等の観点から未分化細胞から成熟してゆく過程が想定されている。ラット及び仔ブタ(生後50日前後)の分離肝細胞に培養初期(培養開始3日目前後)に増殖性の強い細胞が再現性よく得られた。肝実質細胞は培養下で殆ど増殖しないが、仔ブタ肝細胞では播種数(5x10^6/10cmディッシュ)を上回る増殖を見た。分化機能は薬物代謝活性(7-Ethoxycoumarin deethylation)の経時変化を検討している。一方、細胞療法のシミュレーションとしてCrigler-Najjar症候群のモデル動物でビリルビン抱合酵素欠損のGUNNラットにこれらの肝細胞を門脈内投与したところ血中ビリルビンを良好に1ヶ月以上低下させる1結果を得た。尚、ブタ肝細胞投与に際しては免疫抑制としてFK506投与(1mg/kg,i.m.)を行った。また、ヒト羊膜細胞内に肝上皮幹細胞様の細胞の存在を認め、新たな肝上皮肝細胞のソースとして検討を加えている。
2)肝細胞分化誘導因子の探求
ラット、マウスの場合、胎生12日頃に肝芽細胞から肝細胞への分化が起こり細胞内にアルブミン合成が認められる。この時期の胎児組織の抽出液を培地内に加え、初代培養肝細胞の分化機能の維持状態を検討している。本年はそのスクリーニング条件を整備し薬物代謝活性による探求を可能とした。
3)、4)、遺伝子導入、及び、新規免疫抑制法の開発については業績(Suzuki et al,Li et al,Okuyama et al)を参照していただきたい。

Research Products

• [Publications] Enosawa S et al.: "An attempt to add biological functions by genetic engineering in order to produce high-performance bioreactor cells for hybid artificial liver : Transfection of glutamine synthetase into chinese hamster ovary (CHO) cell." Cell Transplantation. 6. 537-540 (1997)
• [Publications] Enosawa S et al.: "Higher efficiency of retrovirus transduction in the late stage of primary culture of hepatocytes from non-treated than from partially hepatectomized rat." Cell Transplantation. (in press). (1998)
• [Publications] Suzuki S et al.: "The induction of lymphocyte apoptosis in MRL lpr/lpr mice treated with FTY720." Clin Exp Immunol. 107. 103-111 (1997)
• [Publications] Suzuki S et al.: "An immunosuppressive regimen using FTY720 combined with cyclosporine in kidney transplantation." Transplant Int. (in press). (1998)
• [Publications] Li X-K et al.: "FTY720,a novel immunosuppressive agent,enhances upregulation of the cell adhesion molecules ICAM-1 in TNF-a treated human umblical vein endothelial cells." Transplant Proc. 29. 1265-1266 (1997)
• [Publications] Li X-K et al.: "Induction of lymphocyte apoptosis by a novel immunosuppressant FTY720 : Relation with Fas,Bcl-2 and Bax expression." Transplant Proc. 29. 1267-1268 (1997)
• [Publications] Okuyama T et al.: "J Gastroent Hepat" Fas-mediated apoptosis is involved in the elimination of gene-transducted hepatocytes with E1/E3-deleted adenoviral vectors.(in press), (1998)
• [Publications] Okuyama T et al.: "Human Gene Therapy" Effeicient Fas-ligand gene expression in rodent liver after intravenous injection of a recombinant adenovirus by the use of a Cre-mediated switching system.(in press), (1998)