アデノウイルス発現ベクターを用いたp16遺伝子導入による食道癌、膵癌治療の試み

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09671280
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Research Institution: Chiba University
• Principal Investigator: 小林 進 千葉大学, 医学部・附属病院, 講師 (50234828)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 今関 英男 千葉大学, 医学部・附属病院, 助手 (60272308) ; 白澤 浩 千葉大学, 医学部, 教授 (00216194)
• Keywords: p16 / アデノシルスベクター / 遺伝子導入 / 膵癌

Research Abstract

p16^<INK4a>発現アデノウイルスベクターの作製
先ず、東京大学医科研、斎藤泉先生より御供与いただいたアデノウイルス発現ベクターによりp16^<INK4a>発現ベクターを作製した。詳細は以下の如くである。すなわち、開始コドン前約10塩基、終止コドン後約30塩基をつける形で組み込むべきp16^<INK4a>cDNA(0.8kb)をPCR cloningにより、cloningした。これをコスミッドカセットDNAのSwa-1 siteにIn vitro pachage法により組み込み、されに、これをEco T221にて切断された親アデノウイルスとと293細胞にco-transfectし、組換えウイルスを分離しp16^<INK4a>発現アデノウイルスベクターを作製した。
p16^<INK4a>mRNA発言の確認(In vitro)
p16^<INK4a>のhomozygous deletionが確認された膵癌培養細胞株;MIAPaca-2 に対し、上記のp16^<INK4a>発現アデノウイルスベクターによりp16^<INK4a>遺伝子導入を行った。これよりmRNA抽出し、Northern,Western Blot Hybridizationを行ったが、実際にp16^<INK4a>遺伝子導入されたMIAPaca-2にp16^<INK4a>のmRNAの高度の発現が見られることを確認した。
p16^<INK4a>発現による膵癌細胞増殖抑制効果
遺伝子導入によりp16^<INK4a>発現が確認された膵癌培養細胞株;MIAPaca-2とコントロールとしてのアデノウイルス添加されたMIAPaca-2の細胞増殖曲線を比較したがp16^<INK4a>発現によりMIAPaca-2の細胞増殖は有意に抑制された。

Research Products

• [Publications] Susumu Kobayashi et al: "Detection of Hepatitis B VirusX Transcripts in Human Hepatocellular Carcinoma Tissues" Journal of Surgical Research. 73. 97-100 (1997)
• [Publications] 小林進他: "大腸癌、肝細胞癌、食道癌切除標本によるp21^<clpl/WAF1>遺伝子のmRNA表現" 消化器癌の発生と進展. 9. 117-120 (1997)